SBE(EC 2.4.1.18)主要存在于植物中，是参与支链淀粉合成的关键酶，测定SBE活性在淀粉生物合成、优质农作物品种选育和品质遗传改良研究中具有重要意义。

淀粉和碘结合后在660nm有特征光吸收，SBE可切断支链淀粉侧支，从而降低了淀粉-碘复合物在660nm吸收值，一定时间内吸光度下降的百分率可以反映SBE活性。

注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

半岛bd体育手机客户端 内容：

试剂名称	规格	保存条件
提取液	液体25ml×1瓶	4℃
试剂一	液体20ml×1瓶	4℃
试剂二	粉剂×2支	4℃
试剂三	液体25ml×1瓶	4℃
标准品	液体5ml×1瓶	4℃

溶液的配制：

试剂二：临用前加入1ml蒸馏水，缓慢加热，逐渐升温至沸腾，使其充分溶解，备用。

技术指标：最低检出限：0.0074mg/ml线性范围：0.008-0.7mg/ml

注意：

实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的半岛游戏平台官网入口网址 和用品：

可见分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1ml玻璃比色皿、研钵/匀浆器、冰、蒸馏水。

操作步骤：

一、样本处理理(可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献)

称取约0.1g组织加入1ml提取液，冰浴中匀浆。15000g，4℃离心15min，取上清，置冰上待测。

二、测定步骤

1.可见分光光度计预热30min以上，调节波长至660nm，蒸馏水调零。

2.样本测定：

试剂名称(μL)	对照管	测定管
煮沸1min后灭活的样本	250
样本		250
试剂一	320	320
试剂二	30	30
混匀，37℃准确保温20min，置沸水浴中1min终止反应(盖紧防止水分散失)，冷却
试剂三	500	500
试剂四	100	100

混匀，室温静置10min，用蒸馏水调零，660nm处读取各管吸光值。

注意：若有样本浑浊，建议离心后取上清测定。

三、SBE活力单位计算

1.按照蛋白浓度计算单位的定义：

以波长660nm的吸光度下降百分率表示，每mg蛋白在1ml反应体系中每分钟降低1%碘蓝值为一个酶活性单位。

SBE活性(U/mg prot) =(A对照管-A测定管)÷A对照管×100%÷1%÷(Cpr×V样本)×V反应÷T =24×(A对照管-A测定管)÷A对照管÷Cpr

2.按照样本质量计算单位的定义：

以波长660nm的吸光度下降百分率表示，每g组织在1ml反应体系中每分钟降低1%碘蓝值为一个酶活性单位。

SBE活性(U/g质量) =(A对照管-A测定管)÷A对照管×100%÷1%÷(W÷V提取×V样本)×V反应÷T =(A对照管-A测定管)÷A对照管÷W×24

V样本：加入样本体积，0.25ml；V提取：加入提取液体积，1ml；Cpr：蛋白浓度，mg/ml；W：样本质量，g；V反应：反应体系体积，1.2ml；T：反应时间，20min。

注意事项：

1.可以在不同对照管中加入不同的样本，然后集中进行1min沸水浴处理。

2.试剂一如有沉淀，加入之前要使之充分溶解混匀。