半岛bd体育手机客户端 介绍
淀粉酶(EC3.2.1.1)是催化淀粉水解的一类酶的总称。土壤中的淀粉酶主要来自于微生物,是一种重要的酶制剂,广泛应用于粮食加工、食品、酿造、发酵、纺织品工业和医药行业。 淀粉酶水解淀粉产生还原糖,可与3,5-二硝基水杨酸反应生成红棕色物质,在540nm处有特征吸收峰,颜色深浅在一定范围内与还原糖量成正比。 注意:实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。 半岛bd体育手机客户端 组成:
溶液的配制: 1.试剂二:临用前加入5ml蒸馏水,置于常温水中并加热至煮沸,期间不断搅拌或震荡至粉剂溶解。 2.标准品:10mg麦芽糖。临用前加入1.38ml蒸馏水配制成20μmol/ml的储备液。 需自备的半岛游戏平台官网入口网址 和用品: 天平、水浴锅、低温离心机、可见分光光度计、1ml玻璃比色皿、30~50目筛、研钵、甲苯(不允许快递)。 操作步骤: 一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可参考文献) 新鲜土样自然风干或37℃烘箱风干,过30~50目筛。 二、测定步骤 1.分光光度计预热30min,波长调至540nm,蒸馏水调零。 2.将20μmol/ml的麦芽糖储备液用蒸馏水稀释为1、0.9、0.8、0.7、0.6、0.5、0.4、0.3μmol/ml的标准溶液备用。 3.步骤:
三、土壤淀粉酶活力的计算 1.标准曲线的绘制: 以标准溶液的浓度为 x轴,ΔA标准为 y轴绘制标准曲线,得到标准方程 y=kx+b。将ΔA测定带入方程得到x(μmol/ml)。 2.酶活的计算: 单位的定义:每天每 g土样产生 1μmol还原糖定义为一个土壤淀粉酶活力。 S-AL(U/g土样)=x×V反总÷W÷T=0.42×x÷W V反总:酶促反应总体积,0.42ml;W:土样质量,g;T:反应时间,1d。 注意事项: 1.当ΔA大于 1时,建议将上清液稀释后再进行测定,注意在计算公式中乘以稀释倍数。 2.若ΔA测定较小,增加反应的上清液体积或适当增加酶促反应时间,计算酶活时对公式进行修改。 3.建议每次实验煮沸后的冷却时间保持一致,吸光值请于 30min内测定完成。 实验实例: 1.取 0.1g三叶草土于 1.5mlEP管中,依次加入 20μL甲苯、200μL试剂一、200μL试剂二为测定管;取 0.1g三叶草土于 1.5mlEP管中,依次加入 20μL甲苯、200μL试剂一、200μL蒸馏水为对照管,均放于 37℃培养24h,后离心取上清再液稀释 5倍 ,之后按照测定步骤操作 ,测得计算 ΔA测定管 =A测定管 -A对照管=0.624-0.109=0.515,标准曲线:y=1.289x-0.2826,x=0.6188,按土样重量计算酶活:S-AL(U/g土样)=0.42×x÷W×5(稀释倍数)=0.42×0.6188÷0.1×5(稀释倍数)=12.995U/g土样。 参考文献: [1] Kathiresan K, Manivannan S. α-Amylase production by Penicillium fellutanum isolated from mangrove rhizospHere soil[J]. African journal of Biotechnology, 2006, 5(10). [2] Ebregt A, Boldewijn J. Influence of heavy metals in spruce forest soil on amylase activity, CO 2 evolution from starch and soil respiration[J]. Plant and Soil, 1977, 47(1): 137-148. |
相关半岛bd体育手机客户端
|