产品及特炸�/strong>

肾棒状杆�?Corynebacterium renale)革兰氏染色阳性，为球杆状或棍棒状，呈单在、成丛或栅栏样排列。细菌性肾盂肾炎由肾棒状杆菌引起，主要发生于母牛，公牛少见，马和绵羊偶可发生。本病为尿源性感染，因此病原菌经尿道生殖道口感染后，先引起尿道炎、膀胱炎或子宫内膜炎，然后再逆行导致肾盂肾炎。由于肾组织损伤与尿液滞留，最终病畜可因尿毒症而死亡。病牛主要表现发热，食欲不振，尿频，尿少，尿因混有黏液、脓液、大量蛋白质、脓细胞和白细胞、脱落的上皮细胞等而浑浊带血色。尿液涂片或细菌培养可发现病原菌。严重病例常发生尿毒症。因此牛肾盂肾炎棒杆菌检测具有重要的意义。本试剂盒根� PCR原理开发，它具有下列特点：

1、即开即用，用户只需要提� DNA模板、�/span>

2、引物经过精心优化，专一性强，只扩增牛肾盂肾炎棒杆菌、�/span>

3、提供阳性对照，便于区分假阴性样品、�/span>

4、PCR mix中含上样染料，PCR后可以直接上样电泳、�/span>

5、本试剂盒足够做 40μL体系� PCR 50次、�/span>

6、本产品只能用于科研、�/span>

规格及成刅�/strong>

成份	编号	十孔盒包裄�/span>
PCR MagicMix 3.0	90805	1 mL(红盖)
超纯氳�/span>	100935	1 mL(亮黄�?
牛肾盂肾炎棒杆菌 PCR引物混合涱�/span>	13-15850yw	100 μL(白盖)
牛肾盂肾炎棒杆菌 PCR阳性对�?1×108拷贝/μL)	60908-15850pc	100 μL(黄盖)
DNA释放�?试用�?	130982	20�?1mL、绿�?
使用手册	13-15850sc	1仼�/span>

运输及保字�/strong>

低温运输�?20℃保存，保存期限为一年。阳性对照需要单独放置，不要污染其他试剂、�/span>

自备试剂

样品 DNA、�/span>

使用方法

一、样� DNA的制夆�/span>

1、如果有 N个样品，必须设置 N+2个提取，多出的一个是 PC(样品制备阳性对�?，一个是 NC(样品制备阴性对�?。可以用 10μL阳性对照的10000倍稀释液再加上一定量的水使总体积跟每次制备要求的体积一样，以此作为 PC。另外用水作� NC、�/span>

2、用自选方法纯化样品的 DNA，本试剂盒跟市场上大多数细菌 DNA提取试剂盒兼容。也可以选购本公司的细菌 DNAout或柱式细� DNAout。本试剂盒免费赠� 50次免 DNA提取� DNA释放剂，本产品的裂解液可以直接作� PCR模板，省略了 DNA提取步骤、�/span>

二、设� PCR反应(40 μL体系)

3、对 N+2个样品，� PCR时需要增加一� PCR阳性对照和一� PCR阴性对照，故需要设� N+4个反应。在 N+4� PCR管中分别加入下列成分９�/span>

成分	N+2个样品管	PCR阴性对�?/span>	PCR阳性对�?/span>
PCR MagicMix 3.0	� 20 μL	20 μL	20 μL
牛肾盂肾炎棒杆菌 PCR引物混合涱�/span>	� 2 μL	2 μL	2 μL
N+2个样� DNA模板	� 18 μL	-	-
样品制备阴性对�?/span>	-	18 μL	-
样品制备阳性对�?/span>	-	-	18 μL

4、按下表设置 PCR反应９�/span>

过程	温度	时间
预变�?/span>	95ℂ�/span>	5 min
PCR反应(35个循�?	95ℂ�/span>	30 sec
PCR反应(35个循�?	55ℂ�/span>	30 sec
PCR反应(35个循�?	72ℂ�/span>	30 sec
最后延伷�/span>	72ℂ�/span>	10 min

三、电泳检浊�/span>

5、取 10-20 μL PCR产物。电泳检� PCR产物。本产品提供� PCR Mix在扩增结束后可以直接上样，不需要另外再� loading buffer。阳性对照必须有条带出现，阴性对照必须无任何扩增，否则实验无效。对没有扩增产物的样品，可以稀� 10倍后重复 PCR扩增以排� PCR抑制剂的感染、�/span>