实验报告９�/span>

一�?/span>Renca-RFP荧光标记细胞�?/span>分离与培养：

1、无菌条件下，取�?-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清�?次，最后将组织剪成1mm3左右大小：�/span>

2、往组织块中加入4 mL酶消化液�?.1% 胰酶�?.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加�?�?mL酶消化液，混�?0s，置37℃消�?0 min后，按上述方法收集上清并终止消化�?℃放置，重复此步�?-3次，直至组织完全被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含�?0� FBS DMEM/F12培养基混悬，接种�?5cm2培养瓶，放置�?7� �?％CO2 培养箱中培养：�/span>

5、差速贴�?h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；

二、免疫荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min：�/span>

2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min：�/span>

3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，�?% BSA封闭细胞30min：�/span>

4、按1: 100的比例稀释�?actin一抗（Abbioscience公司），然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜：�/span>

5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1�?50的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h：�/span>

6、用PBS冲洗3次，每次10min，最后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照、�/span>

产品名称	产品简�?/span>	货号
Renca-RFP荧光标记细胞�?/span>	Renca-RFP	GOY-N0037

特性：

安全性：所有肿瘤和病毒转染的细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需高压灭菌后方能丢弃。收到细胞后，在倒置镜下好是�?/span>4X物镜)观察整个细胞生长情况

（一）如果细胞未长满，用75%酒精喷洒整个瓶消毒后放到超菌台内，严格无菌操作，打开细胞培养瓶，吸出培养液，� 10ml新鲜培养液后继续培养、�/span>

(�?如果细胞已长满，即可进行传代培养。具体步骤如下：

1. 弃去培养液，用PBS（不含钙,镁离子）�?-2次、�/span>

2. �?ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，倒放�?7℃培养箱1-3分钟预热，之后翻转培养瓶10-30秒后，在倒置显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量完全培养基终止消化、�/span>

3. �?-8ml/瓶补加完全培养基，轻轻打匀后吸出一半，分到新的培养瓶中、�/span>

细胞特性：

1)组织来源于实验动物的正常眼组织、�/span>

2)细胞鉴定：细胞角蛋白-18(CK-18)免疫荧光染色为阳性、�/span>

3)经鉴定细胞纯度高�?0%、�/span>

4)不含� HIV-1� HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌、�/span>

5)细胞生长方式：上皮样，不规则细胞，贴壁培养、�/span>

注意事项９�/span>

1、观察细胞zui好在低倍镜�?�?X物镜)下进行，否则不能准确判断细胞的传代密度。看细胞的形态请�?0X�?0X物镜下、�/span>

2、瓶中运输培养基不能重复再用,请换用加双抗的新培养基，细胞冻存�?培养基中可不加任何抗生素、�/span>

3、有些细胞贴壁不牢，如发现贴壁细胞有脱落，可离心吹打后接种到新瓶内、�/span>

4、收到细胞后，若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染，请及时与我们、�/span>

4-羟基-3-甲基吡啶

2--3-甲基-5-硝基吡啶

2--3-甲基-5-硝基吡啶

6--2-甲基-3-硝基吡啶

6--2-甲基-3-硝基吡啶

6--2-甲基-3-硝基吡啶

2-氨基-5-硝基-6-甲基吡啶

2-氨基-5-硝基-6-甲基吡啶

2-�?4-吡啶

2-�?4-吡啶

Acetylcholinesterase,AChE ELISA KitHPLC�?8%100mLGAD65 antibody IgG ELISA Kit

microalbunminuria,MAU/ALB ELISA KitHPLC�?8%100mLglutamic acid decarboxylase 65,GAD65 ELISA Kit

osteoclast differentiation factor,ODF ELISA KitHPLC�?8%100mLglutamic acid decarboxylase,GAD ELISA Kit

alkaline phosphatase,ALP ELISA KitHPLC�?8%100mLglutamate receptor,NMDAR ELISA Kit

heparin-binding epidermal growth factor-like growth factor,HB-EGF ELISA KitHPLC�?8%100mLGOT2 ELISA Kit

Mannma binding protein/mannan binding lectin,MBP/MBL ELISA KitHPLC�?8%100mLGCLM ELISA Kit

sorbitol dehydrogenase,SDH ELISA KitHPLC�?8%100mLNR-2 Antibody ELISA Kit

特性：

安全性：所有肿瘤和病毒转染的细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需高压灭菌后方能丢弃。收到细胞后，在倒置镜下好是�?/span>4X物镜)观察整个细胞生长情况

（一）如果细胞未长满，用75%酒精喷洒整个瓶消毒后放到超菌台内，严格无菌操作，打开细胞培养瓶，吸出培养液，� 10ml新鲜培养液后继续培养、�/span>

(�?如果细胞已长满，即可进行传代培养。具体步骤如下：

1. 弃去培养液，用PBS（不含钙,镁离子）�?-2次、�/span>

2. �?ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，倒放�?7℃培养箱1-3分钟预热，之后翻转培养瓶10-30秒后，在倒置显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量完全培养基终止消化、�/span>

3. �?-8ml/瓶补加完全培养基，轻轻打匀后吸出一半，分到新的培养瓶中、�/span>