斑马鱼雌二醇（E2）elisa试剂盒操作步骣�/p>

1.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释、�/p>

80 pmol/L

5号标准品

150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液

40 pmol/L

4号标准品

150μl�?号标准品加入150μl标准品稀释液

20 pmol/L

3号标准品

150μl�?号标准品加入150μl标准品稀释液

10 pmol/L

2号标准品

150μl�?号标准品加入150μl标准品稀释液

5 pmol/L

1号标准品

150μl�?号标准品加入150μl标准品稀释液

2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加�?0μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样�?0μl（样品zui终稀释度�?倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀、�/p>

3. 温育：用封板膜封板后�?7℃温�?0分钟�?nbsp;

4. 配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用

5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静�?0秒后弃去，如此重�?次，拍干、�/p>

6. 加酶：每孔加入酶标试�?0μl，空白孔除外、�/p>

7. 温育：操作同3、�/p>

8. 洗涤：操作同5、�/p>

9. 显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀�?7℃避光显�?5分钟.

10.终止：每孔加终止�?0μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）、�/p>

11.测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）� 测定应在加终止液�?5分钟以内进行、�/p>