小鼠骨保护素elisa试剂盒操作方法：

实验开始前，请提前配置好所有试剂，试剂或样品稀释时，均需混匀，混匀时尽量避免起泡。每次检测都应该做标准曲线。如样品浓度过高时，用样品稀释液进行稀释，以使样品符合试剂盒的检测范围、�/p>

1.加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液100μl，余孔分别加标准品或待测样品100μl，注意不要有气泡，加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，酶标板加上盖或覆膜�?7℃反�?20分钟、�/p>

为保证实验结果有效性，每次实验请使用新的标准品溶液

2.弃去液体，甩干，不用洗涤。每孔加生物素标记抗体工作液100μl（取1μl生物素标记抗体加99μl生物素标记抗体稀释液的比例配制，轻轻混匀，在使用前一小时内配制）�?7�?60分钟、�/p>

3.温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分钟�?50μl/每孔，甩干、�/p>

4.每孔加辣根过氧化物酶标记亲和素工作液（同生物素标记抗体工作液�?00μl�?7℃，60分钟、�/p>

5.温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分钟�?50μl/每孔，甩干、�/p>

6.依序每孔加底物溶�?0μl�?7℃避光显色（30分钟内，此时肉眼可见标准品的�?-4孔有明显的梯度蓝色，�?-4孔梯度不明显，即可终止）、�/p>

7.依序每孔加终止溶�?0μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同。为了保证实验结果的准确性，底物反应时间到后应尽快加入终止液、�/p>

8.用酶联仪�?50nm波长依序测量各孔的光密度（OD值）。在加终止液�?5分钟以内进行检测、�/p>