β-GC(EC 3.2.1.21)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，催化�?糖苷键水解，具有多方面生理作用：在纤维素的糖化作用中，�?GC负责进一步水解纤维素二糖和纤维素寡糖生成葡萄糖；β-GC水解萜烯类香气前驱体，使糖苷键合态变成游离态。从而产生香味；β-GC能够水解植物体内野黑樱苷，释放HCN，从而防止昆虫取食、�/span>

β-GC分解�?硝基�?β-D-吡喃葡萄糖苷生成�?硝基苯酚，后者在400nm有最大吸收峰，通过测定吸光值升高速率来计算�?GC活性、�/span>

注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测、�/span>

产品组成９�/strong>

试剂名称	规格	保存条件
提取涱�/span>	液体50ml×1瓵�/span>	4ℂ�/span>
试剂一	粉剂×2瓵�/span>	-20ℂ�/span>
试剂事�/span>	液体25ml×1瓵�/span>	4ℂ�/span>
试剂丈�/span>	液体80ml×1瓵�/span>	4ℂ�/span>
标准�?/span>	液体1ml×1�?/span>	4ℂ�/span>

溶液的配制：

试剂一：临用前每瓶加入10ml双蒸水，充分溶解备用；用不完的试剂仍-20℃保存；

标准品：5μmol/ml的对硝基苯酚溶液、�/span>

需自备的仪器和用品９�/span>

可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器�?ml玻璃比色皿、研�?匀浆器、冰和蒸馏水

操作步骤９�/strong>

一、样本处�?可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文�?

1.细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量(104�?：提取液体积(ml)�?00�?000�?的比�?建议1000万细菌或细胞加入1ml提取�?，超声波破碎细菌或细�?冰浴，功�?0%�?00W，超�?s，间�?0s，重�?0�?�?5000g 4℃离�?0min，取上清，置冰上待测、�/span>

2.组织：按照组织质�?g)：提取液体积(ml)�?�?�?0的比�?建议称取�?.2g组织，加�?ml提取�?，进行冰浴匀浆�?5000g 4℃离�?0min，取上清，置冰上待测、�/span>

二、测定步驞�/span>

1.分光光度计预�?0min以上，调节波长至400nm，蒸馏水调零、�/span>

2.标准样本的准备：�?00μL标准液，加入�?00μL试剂三中，得�?μmol/ml标准液，十倍稀释到100nmol/ml，用蒸馏水倍比稀释：50�?5�?2.5�?.25nmol/ml�?00�?0�?5�?2.5�?.25�?nmol/ml做标准液、�/span>

3.加样表：

试剂名称(μL)	测定箠�/span>	对照箠�/span>	标准箠�/span>
试剂一		400
试剂事�/span>	500	500
样本	100	100
迅速混匀，放�?7℃准确水�?0min后，立即放入沸水浴中煮沸5min(盖紧，以防止水分散失)，流水冷却后充分混匀(以保证浓度不�?
试剂一	400
充分混匀�?000g�?℃，离心5min，取上清涱�/span>
上清涱�/span>	500	500
标准涱�/span>			500
试剂丈�/span>	1000	1000	1000
充分混匀，室温静�?min后，400nm处测定吸光值A，计算ΔA=A测定�?A对照管。每个测定管需设一个对照管、�/span>

三、�? GC活力单位的计箖�/strong>

1.标准曲线建立：根据标准管的浓�?x)和吸光度(减去浓度�?标准管的OD值，y)，建立标准曲线。根据标准曲线，将ΔA

(y)带入公式计算样本产物浓度x(nmol/ml)、�/span>

2.按样本蛋白浓度计算：

单位的定义：每mg组织蛋白每小时产�?nmol�?硝基苯酚定义为一个酶活力单位、�/span>

β-GC活力(U/mg prot)=(x×V反�?÷(V样×Cpr)÷T=20x÷Cpr

蛋白浓度需要另外测定、�/span>

3.按样本质量计算：

单位的定义：每g组织在每小时产生1nmol�?硝基苯酚定义为一个酶活力单位、�/span>

β-GC活力(U/g质量) = (x×V反�?÷(W×V样÷V样�?÷T=20x÷W

4.按细菌或细胞数量计算９�/span>

单位的定义：�?万个细菌或细胞每小时产生1nmol�?硝基苯酚定义为一个酶活力单位、�/span>

β-GC活力(U/10⁴cell)=(x×V反�?÷(1000×V样÷V样�?÷T=0.02x Cpr：样本蛋白质浓度，mg/ml；V反总：反应体系总体积，1ml；V样：加入反应体系中样本体积，0.1ml；V样总：加入提取液体积，1ml；W：样本质量，g�?000：细胞或细菌总数�?000万；T：反应时间，0.5h、�/span>