产品内容９�/span>

试剂一：液�?5ml×1瓶，常温保存，若有黄色晶体析出，需加热溶解后再用；

试剂二：粉剂×1瓶，4℃保存。临用前加入20ml蒸馏水，置于常温水中并加热至煮沸，期间不断搅拌粉至溶解、�/span>

标准品：粉剂×1支，10mg无水葡萄糖、�/span>

产品说明９�/span>

淀粉酶负责水解淀粉，主要包括α-淀粉酶和�?淀粉酶。�?淀粉酶(EC 3.2.1.2)从淀粉的非还原端切开α-1,4糖苷键，生成葡萄糖、麦芽糖、麦芽三糖、糊精等还原糖、�/span>

还原糖还� 3,5-二硝基水杨酸生成棕红色物质。�?淀粉酶不耐酸，�?淀粉酶不耐热。根据上述特性，钝化其中之一，就可测出另一种淀粉酶的活力、�/span>

需自备的仪器和用品９�/span>

可见分光光度�?酶标仪、恒温水浴锅、离心机、可调式移液器�?6孔板/微量玻璃比色皿、研钵和蒸馏水、�/span>

操作步骤９�/span>

一、粗酶液提取９�/span>

称取�?.1g样本，加�?.8ml蒸馏水，研磨匀浆；将匀浆倒入离心管中，提取液在室温下放置提取15min，每5min振荡1次，使其充分提取�?000g，常温离�?0min，取上清液加蒸馏水定容至10ml，摇匀，即淀粉酶原液。吸取上述淀粉酶原液1ml，加�?ml双蒸水，摇匀，即为淀粉酶稀释液，用�?α＋�?淀粉酶总活力的测定、�/span>

二、测定操作表９�/span>

1、可见分光光度计/酶标仪预�?0min以上，调节波长至540nm，蒸馏水调零、�/span>

2、将葡萄糖标准液稀释为1�?.5�?.25�?.1325�?.0625�?.03425�?.015625�?.0078�?.0039mg/ml的标准溶液、�/span>

3、按操作表依次加入各试剂９�/span>

试剂名称(μL)	α-淀粉酶活力测定		总淀粉酶活力测定		标准曲线的测宙�br/>
试剂名称(μL)	对照箠�/span>	测定箠�/span>	对照箠�/span>	测定箠�/span>	空白箠�/span>	标准箠�/span>
淀粉酶原液	75	75			-	-
蒸馏氳�/span>					-	75
标准溶液					75	-
70℃水�?5min左右，冷即�/span>
淀粉酶稀释液			75	75	-	-
试剂一					-	-
试剂事�/span>		75		75
�?0℃恒温水浴中准确保温5min
试剂一	150	150	150	150	150	150
试剂事�/span>	75	0	75		75	75
混匀�?0℃水�?0min，在200μL�?6孔板或微量玻璃比色皿中，�?40nm下测定吸光度，从左到右分别记为A1、A2、A3、A4、A5和A6，计算ΔAα=A2-A1，ΔA怺�A4-A3，ΔA标准=A6-A5、�/span>

酶活性计算：

1、标准曲线的绘制

�?#8710;A标准为y轴，以标准溶液浓度为x轴，绘制标准曲线，得到方程y=kx+b。将?Aα测定带入方程得到x1(mg/ml)�?#8710;A总代入方程得到x2(mg/ml)、�/span>

2、�?淀粉酶活�?/span>

(1)按照样本质量计算

单位定义：每g组织每分钟催化产�?mg还原糖定义为1个酶活力单位、�/span>

α-淀粉酶活�?mg/g鲜重)=x1×V样�?W×V样÷V样�?÷T =2×x1÷W

(2)按照蛋白质含量计箖�/span>

单位定义：每mg组织蛋白每分钟催化产�?mg还原糖定义为1个酶活性单位、�/span>

α-淀粉酶活�?mg/mg prot)=x1×V样�?V样×Cpr)÷T = 0.2×x1÷Cpr

3、总淀粉酶活性计箖�/span>

(1)按照样品质量计算

单位定义：每g组织每分钟催化产�?mg还原糖定义为1个酶活力单位、�/span>

总淀粉酶活� (mg/g鲜重 )=5×x2×V样�?W×V样÷V样�?÷T=10×x2÷W

(2)按照蛋白质含量计箖�/span>

单位定义：每mg组织蛋白每分钟催化产�?mg还原糖定义为1个酶活力单位、�/span>

总淀粉酶活�?U/mg/mg prot)= 5×x2×V样�?V样×Cpr)÷T = x2÷Cpr

4、�?淀粉酶活性计箖�/span>

(1)按照样品质量计算

单位定义：每g组织在反应体系中每分钟催化产�?mg还原糖定义为1个酶活力单位、�/span>

β-淀粉酶活�?U/g鲜重)＝淀粉酶总活性－α-淀粉酶活�?(10×x2÷W)-(2×x1÷W)=(10×x2-2×x1)÷W

(2)按照蛋白质含量计箖�/span>

单位定义：每mg组织蛋白在反应体系中每分钟催化产�?mg还原糖定义为1个酶活力单位、�/span>

β-淀粉酶活�?U/mg prot)=淀粉酶总活性－α-淀粉酶活�?(x2÷Cpr)-(0.2×x1÷Cpr)

5、总淀粉酶稀释倍数:V样：加入反应体系中样本体积，0.075ml；V样总：提取液总体积，10ml；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/ml；W：样本质量，g；T：反应时间，5min、�/span>

注意事项：测定的吸光值大�?.5时，可以对样本进行适当稀释后测定、�/span>