β-1,4-葡聚糖酶/纤维二糖苷酶(C1，EC 3.2.1.91)存在于细菌、真菌和动物体内，是纤维素酶系的组份之一，C1酶作用于纤维素线状分子的末端，水解�?葡萄糖苷键，每次切下1个纤维二糖分子、�/span>

S-C1能够催化对硝基苯纤维二糖�?PNPC)生成�?硝基苯酚，后者在400nm有特征光吸收、�/span>

注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测、�/span>

产品组成９�/strong>

试剂名称	规格	保存条件
试剂一	液体3ml×1�?自备)	4ℂ�/span>
试剂事�/span>	粉剂×2瓵�/span>	4ℂ�/span>
试剂丈�/span>	液体50ml×1瓵�/span>	4ℂ�/span>
试剂囚�/span>	液体60ml×1瓵�/span>	4ℂ�/span>
标准�?/span>	液体1ml×1�?/span>	4ℂ�/span>

溶液的配制：

1.试剂一：甲苯自备、�/span>

2.试剂二：临用前每瓶加�?0ml试剂三，充分溶解备用，用不完的试剂仍4℃保存、�/span>

3.标准品：5mmol/L的对硝基苯酚溶液。临用前用试剂三将标准品稀�?0倍得100μmol/L的标准溶液、�/span>

需自备的仪器和用品９�/strong>

可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器�?ml玻璃比色皿、研钵、冰�?0-50目筛、甲�?不允许快�?和蒸馏水、�/span>

操作步骤９�/strong>

一、样本处�?可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文�?

新鲜土样自然风干�?7℃烘箱风干，�?0-50目筛、�/span>

二、测定步骣�/strong>

1.分光光度计预�?0min以上，波长调�?00nm，蒸馏水调零、�/span>

2.加样表：

试剂名称	测定箠�/span>	对照箠�/span>	标准箠�/span>	空白箠�/span>
风干土样(g)	0.1	0.1	-	-
试剂一(μL)	50	50	-	-
振荡混匀，使土样润湿，室温放� 15min
试剂�?μL)	400	-	-	-
试剂�?μL)	500	500	-	-
混匀�?7℃水浴反� 1h后，立即沸水� 5min(盖紧，防止水分散�?，流�?冰浴冷却、�/span>
试剂�?μL)	-	400	-	-
10000rpm 25℃离� 10min，取上清涱�/span>
上清�?μL)	500	500	-	-
标准�?μL)	-	-	500	-
蒸馏�?μL)	-	-		500
试剂�?μL)	1000	1000	1000	1000

充分混匀，室温静� 2min后，测定吸光� A，分别记� A测定管、A对照管、A标准管、A空白管。计算ΔA=A测定�?A对照管，ΔA标准=A标准�?A空白管。每个测定管设一个对照管、�/span>

三、S-C1活力计算

单位的定义：每天� g土样中产� 1μmol�?硝基苯酚定义为一个酶活力单位、�/span>

S-C1活力(U/g土样)=ΔA÷(ΔA标准÷C标准)×V反总÷W÷T =2.28×ΔA÷ΔA标准÷W

T：反应时间，1h=1/24d；V反总：反应体系总体积：9.5×10^-4L；C标准：标准溶液浓度，100μmol/L；W：样本质量，g、�/span>

注意事项:

当吸光值大� 1.5时，建议将上清液用试剂三稀释后测定或者减少土样质量测定、�/span>

实验实例９�/strong>

1.取两� 0.1g土样，即为测定管和对照管，按照测定步骤操作，记为 A测定管、A对照管。计算ΔA测定=A测定�?A对照箠�0.79-0.308=0.482，ΔA标准=A标准�?A空白箠�0.599-0=0.599，计算酶活得９�/span>

S-C1活力(U/g土样)=2.28×ΔA测定÷ΔA标准÷W=2.28×0.482÷ 0.599÷0.1=18.3466 U/g土样、�/span>

2.取两� 0.1g林土样，即为测定管和对照管，按照测定步骤操作，记� A测定管、A对照管。计算ΔA测定=A测定�?A对照箠�0.613-0.346=0.267，ΔA标准=A标准�?A空白箠�0.599-0=0.599，计算酶活得９�/span>

S-C1活力(U/g土样)=2.28×ΔA测定÷ΔA标准÷W=2.28×0.267÷0.599÷0.1=10.163U/g土样、�/span>