产品及特炸�/strong>

登革病毒(Dengue Virus，DENV)是一� RNA病毒，主要通过埃及伊蚊和白纹伊蚊等媒介昆虫传播，可以引起登革热以及发病率和死亡率很高的登革出血热和登革休克综合征，登革热病毒分化成四大家族，被病毒学家称为 DF-1、DF-2� DF-3、DF-4病毒型。本产品是根� PCR原理开发的登革病毒 2型检测的试剂盒。它具有下列特点９�/span>

1、一站式，用户不需要单独准备每种成分，包括引物和对照、�/span>

2、根据登革病� 2型的保守基因序列设计的引物，具有良好的特异性、�/span>

3、灵敏度可以达到 1000拷贝/反应、�/span>

4、使用一管式 RT-PCR技术，RT� PCR两步在一个试管内完成，不需要中间转移样品，降低了操作误差和可能的污染、�/span>

5、本产品足够 50� 20μL体系� RT-PCR、�/span>

6、本产品只能用于科研，不能用于临床、�/span>

规格及成刅�/strong>

成份	编号	十孔盒包裄�/span>
5×双酶一管式 RT-PCR Buffer	91202a	200 μL(橘黄�?
MMLV-Taq Mix	91202b	75 μL(红盖)
超纯氳�/span>	100935	1 mL(亮黄�?
登革病毒 2� RT-PCR引物混合涱�/span>	13-64820yw	100 μL(白盖)
登革病毒 2� RT-PCR阳性对�?1×108拷贝/μL)	60908-64820pc	50 μL(黄盖)
使用手册	13-64820sc	1仼�/span>

注：为避免扩散传染性病原，本产品不提供活体样品做阳性对照，只提供专一的DNA片段作为阳性对照、�/span>

运输及保字�/strong>

低温运输�?20℃保存，保存期限� 12个月。收到货后阳性对照需要跟其他成分分开放置，因为其容易污染其他成分，造成假阳性、�/span>

自备试剂

样品 RNA

使用方法

一、样� RNA的制夆�/span>

1、如果有 N个样品，必须设置 N+2个提取，多出的一个是 PC(样品制备阳性对�?，一个是 NC(样品制备阴性对�?。可以用 10μL登革病毒 2� RT-PCR阳性对照的 1000倍稀释液作为制备的阳性对照。可以用水作为制备的阴性对照。制备所得成为样� RNA、�/span>

2、用自选方法纯� N+2个样品的 RNA，本试剂盒跟市场上大多数病毒 RNA提取试剂盒兼容。可以选购本公司的柱式病毒 RNAout、�/span>

二、设� RT-PCR反应(20μL体系)

3、如果有 N+2个样品，则标� N+4� PCR�?额外增加的两个管一个是RT-PCR阳性对照，另一个是 RT-PCR阴性对�?并按照下表在 PCR管中加入下列成分９�/span>

成份	N+2个样品管	RT-PCR阴性对�?/span>	RT-PCR阳性对�?/span>
5×双酶一管式 RT-PCR Buffer	� 4 μL	4 μL	4 μL
登革病毒 2� RT-PCR引物混合涱�/span>	� 2 μL	2 μL	2 μL
N+2个制备的 RNA样品	� 12.5 μL	-	-
超纯氳�/span>	-	12.5 μL	-
登革病毒 2� RT-PCR阳性对照的1000倍稀释液	-	-	12.5 μL
MMLV-Taq Mix	1.5 μL	1.5 μL	1.5 μL

4、上机进� RT-PCR，RT-PCR反应参数丹�

过程	温度	时间
逆转彔�/span>	42ℂ�/span>	30 min
预变�?/span>	95ℂ�/span>	5 min
PCR反应(35个循�?	95ℂ�/span>	30 sec
PCR反应(35个循�?	55ℂ�/span>	30 sec
PCR反应(35个循�?	72ℂ�/span>	30 sec
延伸	72ℂ�/span>	7 min

5、琼脂糖电泳检测扩增效果。如果阴性对照有扩增产物或阳性对照无扩增产物，则说明实验失败，需要分析实验失败的原因。只有在阴性对照没有扩增产物、阳性对照必须有 476bp大小的条带出现，才有必要分析样品的实验结果，如果有预期片段大小的扩增产物则为阳性，如果无则为阴性、�/span>