磷酸化丝裂原活化蛋白激�?5抗体分子标记技术：

（一）原琅�/p>

当应用化学氧化法�?NaI)遇强氧化�?离子被氧化为分子,所生成的自由分子可与某些基团进行卤化反应。蛋白质分子可进行卤化反应的基团主要为残�?残基也可能进行化。在应用胺T( Chloramine T)法的实验�?所用的氧化�?1,3,4,6- tetrachloro-3a,6adipheny l-glucoluril)强挥发性的有机溶剂中。该溶剂加入试管�?先让其挥�?即让氧化剂将试管包被),然后把Na125I和蛋白质液加入包被好的试管中,反应完成即将混合液移入他管终止反应、�/p>

（二）准夆�/p>

1.试剂

经亲和层析纯化的多克隆抗体或单克隆抗体；0.5mol/L磷酸钠缓冲液,pH7.5；无载体的Na125I3.7GBq/ml(100mCi/ml)的NaOH液；100g/L三醋酸；70%乙醇；新鲜制备的�?mg/m1络胺T�?.5mol/L磷酸钠缓冲液(pH7.5）；胺T反应终止缓冲液；

（三）操作要炸�/p>

1.用胺T法进行化,也可在大约pH7.0的缓冲液中进行；

2.如果氧化反应损伤蛋白质，可将抗体与异硫酸荧光�?FITC)偶联)胺T量减少到0.02mg/m，并将偏重亚硫酸液的浓度降到0.024mg/ml：�/p>

3. Iodogen-包被的试管可在干燥器�?于室温下保存多年：�/p>

4.1251标记的抗�?在制备后六周内均可使�?1251的半衰期�?9.6天）：�/p>

5.要注意保证所用的Na1251是新鲜的,陈旧制剂的比活性低：�/p>

6.碘化偶尔会对抗原的抗体结合位点有干扰,因此降低其结合能�?但这种情况很少见、�/p>