小鼠杂交瘤细胞株培养步骤９�/span>

1、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次、�/p>

2、加2ml消化�?0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中，置于37℃培养箱中消�?-2分钟，然后在显微镜下观察Ⅱ型肺泡上皮细胞|细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化、�/p>

3、按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，�?000RPM条件下离�?分钟，弃去上清液，补�?-2mL培养液后吹匀、�/p>

4、将细胞悬液�?:2�?:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中、�/p>

对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：

方法一：收集细胞，1000RPM条件下离�?分钟，弃去上清液，补�?-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液�?:2�?:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中、�/p>

方法二：可选择半数换液方式，弃去半数培养基后，将剩余细胞悬起，将细胞悬液按1:2�?:3的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中、�/p>