产品介绍
转氨酶是催化α-氨基酸和α-酮酸之间氨基转换反应的一组酶，丙氨酸氨基转移?ALT)旧称谷丙转氨?GPT)主要存在于肝细胞浆内，细胞内 ALT浓度远高于血清，肝细胞破坏后血 ALT立即迅速升高，因此 ALT被世界卫生组织推荐为肝功能损害最敏感的检测指标、/span> 丙氨酸氨基转移酶(ALT)检测试剂盒(单试剂速率?其检测原理是丙氨酸氨基转移酶催化丙氨酸与α-酮戊二酸之间的氨基转移反应，丙酮酸与 NADH LDH催化生成 NAD+，上述方法实际为 ALT速率法，其反应公式如下：L-丙氨?α-酮戊二酸→丙酮酸+L-谷氨酸。丙酮酸+NADH+H+→L-乳酸+NAD+、/span> 在上述偶联反应中 NADPH的氧化速率与样本中酶活性呈正比。对于单试剂速率法，血清与试剂完整成分的底物溶液混匀，ALT催化反应立即启动，通过分光光度计或自动分析仪检测在 340nm处吸光度下降速率(-ΔA/min)，下降速率(-ΔA/min) ALT活性呈正比，进而计算酶的活性单位。该试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途、/span> 产品组成９/strong>
自备材料９/strong> 1、蒸馏水 2、比色杯、分光光度计或自动分析仪 操作步骤(仅供参?９/strong> 1、准备样品： ①血浆、血清样品：血浆、血清按照常规方法制备，可以直接用于本试剂盒的测定，-20℃保 1个月有效，用 ALT/GPT的检测、/span> ②细胞或组织样品：取恰当细胞或组织进行匀浆，低速离心取上清?20℃保 1个月有效，用 ALT/GPT的检测、/span> ?选做)样品准备完毕后可以用 BCA蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度，以便于后续计算单位蛋白重量组织或细胞内的 ALT/GPT含量、/span> 2、分光光度计检测： 按照下表设置对照管、测定管，溶液应按照顺序依次加入，并注意避免产生气泡。注意：由于酶促反应时间极短，Leagene建议立即检测，加样时间越短越好，其反应基本 1?min内，其后反应趋于平缓。Leagene对照检测参考值在 1?min变化 1.1?.8之间。由于检测仪器、操作手法以及样品酶活性高低等条件的不同，参考值范围会有波动如果样品中的酶活性过高，可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定、/span>
对于量程比较大的比色杯，其加样量应相应增多，检测样本量则对应减少；对于量程比较小的比色杯，其加样量应相应减少，检测样本量则对应增加、/span> 3、生化分析仪检测： 按照下表设置主要参数，如果样品中的酶活性过高，可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定、/span>
计算９/strong> 分光光度计计算公式： ALT(U/L)=ΔA/min×(106/6220)×(945/45)=ΔA/min×3376 式中?220=NADH的吸光度 945=反应液的总体?μl) 45=待测样品体积(μl) 生化分析仪计算公式： ALT(U/L)=ΔA/min×(106/6220)×(315/15)=ΔA/min×3376 式中：ΔA/min=测定?40nm吸光度的升高速率 6220=NADH的吸光度 315=反应液的总体?μl) 15=待测样品体积(μl) 参考范围： 成年健康人血 ALT??0U/L 性能指标９/strong> 空白吸光度值≥1.0 空白测定值≤5U/L 线性范围：0?000U/L 批内 CV<6.0% 批间相对 CV<10% 灵敏度：10U/L 注意事项９/strong> 1、抗坏血 ?0mg/dl ，游离胆红素 ?0mg/dl ，结合胆红素 ?0mg/dl ，血红蛋白≤500mg/dl对测定结果无影响、/span> 2、如果生化分析仪内无所要求波长的滤光片，应选择接近的滤光片、/span> 3、血清中 ALT活性在室温可以保存 2天，4℃保 1周，-20℃保 1个月、/span> 4、严重黄疸、脂血或溶血的血清，可能会引起测定管吸光度增高。有效期?个月有效?℃运输，4℃保存；打开包装以后?℃保 1个月、/span> |
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