注意：正式测定前务必�2-3个预期差异较大的样本做预测定、�/span>

果胶(Pectin)是构成细胞初生壁和中胶层的主要成分，对细胞起着软化和黏合作用。果胶间以Ca²⁺桥及其他离子键、氢键、糖苷键、酯键和苯环偶联的方式交联，通过不同的抽提方法可以提取各种形式的果胶，如水溶性果�?WSP)、离子结合型果胶(ISP)和共价结合果�?CSP)、�/span>

利用带有螯合剂的碱溶液提取共价结合型果胶(CSP)，其在酸性条件下水解生成半乳糖醛酸，后者在硫酸溶液中与咔唑进行缩合反应形成紫红色的化合物，生成物质�?30nm处有最大吸收峰、�/span>

产品内容９�/span>

提取液一�?0%乙醇，自备。即�?0ml无水乙醇�?0ml蒸馏水混合、�/span>

提取液二：液�?0ml× 1瓶，4℃保存、�/span>

提取液三：液�?0ml× 1瓶，4℃保存、�/span>

试剂一：浓硫酸30ml，自备、�/span>

试剂二：液体3ml×1瓶，4℃保存、�/span>

试剂三：液体5ml× 1瓶，4℃保存、�/span>

标准品：粉剂×1支，10mg半乳糖醛酸，4℃保存。临用前加入0.943ml提取液三，配�?0μmol/ml的标准液、�/span>

需自备的仪器和用品９�/span>

可见分光光度�?酶标仪、台式离心机、水浴锅、微量玻璃比色皿/96孔板、可调式移液枪、研�?匀浆器、丙酮、浓硫酸、无水乙醇和蒸馏水、�/span>

操作步骤９�/span>

一、共价结合型果胶的提取：

取约0.1g样本，加�?ml提取液一，室温快速匀浆，95℃水�?0min，冷却至室温�?000g 25℃离�?0min，弃上清。沉淀加入1.5ml提取液一和丙酮交替各�?�?涡旋振荡2min左右�?000g 25℃离�?0min，弃上清即可)，沉淀即为粗细胞壁，加�?ml提取液二(去除淀�?浸泡15小时�?000g 25℃离�?0min，弃上清，加�?ml提取液三，充分匀浆�?000g 4℃离�?0min，取上清液待测、�/span>

二、测定步骤：

1、分光光度计/酶标仪预�?0min以上，调节波长至530nm，蒸馏水调零、�/span>

2、将50μmol/ml标准液用提取液三稀释为0.8�?.7�?.6�?.5�?.4�?.2�?.1�?.05μmol/ml的标准溶液备用、�/span>

3、操作表９�/span>

试剂名称(μL)	空白箠�/span>	标准箠�/span>	对照箠�/span>	测定箠�/span>
样本	-	-	25	25
标准�?/span>	-	25	-	-
蒸馏氳�/span>	25	-	-	-
试剂一	200	200	200	200
混匀�?0℃放�?0min，取出后冷却
试剂事�/span>	-	-	25	-
试剂丈�/span>	25	25	-	25
混匀�?5℃静�?0min后吸�?00μL于微量玻璃比色皿�?6孔板中测�?30nm处吸光值，分别记为A空白管、A标准管、A对照管和A测定管。△A标准=A标准�?A空白管，△A测定=A测定�?A对照管、�/span>

三、共价结合型果胶含量的计算：

1、标准曲线的绘制：以各个标准溶液的浓度为x轴，其对应的△A标准为y轴，绘制标准曲线，得到标准方程y=kx+b，将△A测定带入方程得到x(μmol/ml)

2、共价结合型果胶含量的计算：

共价结合型果胶含�?μmol/g鲜重)= x×V提取液三÷W =x÷W

V提取液三：加入提取液三的体积�?ml；W：样本鲜重，g、�/span>

注意事项９�/span>

1、浓硫酸具有强腐蚀性，操作时需特别注意�?0℃加热取出后冷却再打开盖子，以防液体飞溅烧伤、�/span>

2、若△A超过0.3，可将样本用提取液三进行适当稀释再进行测定，并在计算公式中乘以稀释倍数、�/span>