果胶裂解�?EC 4.2.2.10)是果胶酶的重要组成部分，催化果胶分子链的消除裂解。来源比较广泛，主要来源于微生物，在食品加工工业中提高果汁产量方面有重要意义，在减少环境污染和降低能源消耗方面也具有潜在的应用价值、�/span>

果胶裂解酶作用于果胶中的α-1,4糖苷键，生成在还原端C₄和C₅之间位置具有不饱和键的不饱和寡聚半乳糖醛酸，�?35nm处有特征吸收峰，测定235nm下吸光度的上升来表示果胶裂解酶的活性、�/span>

注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测、�/span>

产品组成９�/strong>

试剂名称	规格	保存条件
提取涱�/span>	液体120ml×1瓵�/span>	2-8ℂ�/span>
试剂一	液体15ml×1瓵�/span>	2-8ℂ�/span>

溶液的配制：

试剂一：溶液中如果有沉淀存在，可�?0℃水浴助溶、�/span>

试验中所需的仪器和试剂:

紫外分光光度�?酶标仪、台式离心机、恒温水浴锅、微量石英比色皿/96孔UV板、可调式移液枪、研�?匀浆器、冰和蒸馏水、�/span>

操作步骤 (仅供参�? ９�/strong>

一、样品处理理(可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文�?

1.组织：按照组织质�?g)：提取液体积(ml)� 1�?�?0的比�?建议称取� 0.1g组织，加� 1ml提取�?，进行冰浴匀浆�?0000g �?℃离� 10min，取上清，置冰上待测、�/span>

2.细菌、真菌：按照细胞数量(10⁴�?：提取液体积(ml)� 500�?000�?的比�?建议 500万细胞加�?ml提取�?，冰浴超声波破碎细胞(功率 300w，超� 3秒，间隔 7秒，总时� 3min)；然� 10000g�?℃离� 10min，取上清置于冰上待测、�/span>

3.培养液：直接测定、�/span>

二、测定步骣�/span>

1.分光光度计或酶标仪预� 30min以上，调节波长至 235nm，蒸馏水调零、�/span>

2.操作表：

试剂名称(μL)	测定箠�/span>	空白箠�/span>
试剂一	180	180
酶液	20	-
蒸馏氳�/span>	-	20
充分混匀后测� 235nm下的初始� A1�?0℃反� 30min后再次测定吸光� A2＋�/span>

计算ΔA测定箠�A2测定�?A1测定管，ΔA空白箠� A2空白�?A1空白管，ΔA=ΔA测定�?ΔA空白管、�/span>

三、果胶裂解酶活性计箖�/span>

A、按微量石英比色皿计算：

1.按照蛋白浓度计算

酶活性定义：� 40℃，pH5.5条件下，每毫克蛋白每分钟分解果胶产生 1nmol不饱和半乳糖醛酸所需的酶量为一个酶活力单位、�/span>

PL活�?U/mg prot)=ΔA÷(ε×d)×V反总�?0⁹÷(V样×Cpr)÷T=64.1×ΔA÷Cpr

2.按照样本质量计算

酶活性定义：� 40℃，pH5.5条件下，每克组织每分钟分解果胶产� 1nmol不饱和半乳糖醛酸所需的酶量为一个酶活力单位、�/span>

PL活�?U/g质量)=ΔA÷(ε×d)×V反总�?0⁹÷(V样×W÷V样�?÷T= 64.1×ΔA÷W

3.按照细菌、真菌数量计箖�/span>

酶活性定义：� 40℃，pH5.5条件下，� 10⁴个细胞每分钟分解果胶产生 1nmol不饱和半乳糖醛酸所需的酶量为一个酶活力单位、�/span>

PL活�?U/10⁴cell)= ΔA÷(ε×d)×V反总�?0⁹÷(V样×细胞数量÷V样�?÷T= 64.1×ΔA÷细胞数量

4.按照培养液体积计箖�/span>

酶活性定义：� 40℃，pH5.5条件下，每毫升培养液每分钟分解果胶产� 1nmol不饱和半乳糖醛酸所需的酶量为一个酶活力单位、�/span>

PL活�?U/ml)=ΔA÷(ε×d)×V反总�?0⁹÷V样÷T= 64.1×ΔA

ε：不饱和半乳糖醛酸摩尔消光系数：5200L/mol/cm；d：比色皿光径�?cm；V反总：反应总体积，0.0002L；V样：反应体系中样本体积，0.02ml；V样总：加入提取液体积，1ml；Cpr：样本蛋白浓度，mg/ml；W，样本质量，g；T：反应时间，30min�?09：换算系数，1mol=109nmol、�/span>

B、按96�UV板计算：

将上述公式中� d-1cm修改� d-0.6cm(96孔板光径)进行计算即可、�/span>

注意事项９�/span>

1.若ΔA大于 0.5，将粗酶液用蒸馏水稀释后再进行测定。若 A测定管大� 1.5时，建议将样本用蒸馏水稀释后再进行测定、�/span>

2.建议一次测定不要测定过多样本以免耽误过多的酶促反应时间、�/span>

3.空白管正常情况下变化不超� 0.02、�/span>