注意：正式测定前务必�2-3个预期差异较大的样本做预测定、�/span>

多聚半乳糖醛酸酶(EC₃.2.1.15)是一种细胞壁结合蛋白，可以催化果胶分子中α-(1,4)-聚半乳糖醛酸的裂解，参与果胶的降解，使细胞壁结构解体，导致果实软化，与果实成熟、叶和花的脱落、病原物防御，细胞伸展发育以及木质化有关，在植物抗病性和食品贮藏保鲜领域具有较高的研究价值、�/span>

多聚半乳糖醛酸酶水解果胶酸生成半乳糖醛酸，具有还原性醛基，与DNS试剂反应生成红棕色物质，�?40nm有特征吸收峰，测�?40nm处吸光值变化可计算得多聚半乳糖醛酸酶活性、�/span>

产品内容９�/span>

提取液：液体50ml×1瓶，4℃保存、�/span>

试剂一：液�?0ml×1瓶，4℃保存、�/span>

试剂二：液体25ml×1瓶，4℃避光保存、�/span>

需自备的仪器和用品９�/span>

天平、低温离心机、可见分光光度计�? ml玻璃比色皿、恒温水浴锅、�/span>

操作步骤９�/span>

一、酶液提叕�/span>

1、组织：按照组织质量(g)：提取液体积(ml)�?�?�?0的比�?建议称取�?.1g组织，加�?ml提取�?，进行冰浴匀浆�?6000g 4℃离�?0min，取上清，置冰上待测、�/span>

2、细菌、真菌：按照细胞数量(104�?：提取液体积(ml)�?00�?000�?的比�?建议500万细胞加�?ml提取�?，冰浴超声波破碎细胞(功率300w，超�?秒，间隔7秒，总时�?min)；然�?6000g�?℃离�?0min，取上清置于冰上待测、�/span>

3、培养液：直接检测、�/span>

二、测定操作表

试剂名称(μL)	对照箠�/span>	测定箠�/span>
样本		100
煮沸样本	100
试剂一	400	400
40℃水�?0min
试剂事�/span>	500	500
沸水�?min，冰浴或自来水冷却，蒸馏水调零，1ml玻璃比色皿测�?40nm处吸光值A，△A=A测定�?A对照管、�/span>

三、酶活性计算公弎�/span>

标准曲线：y = 0.1544x - 0.1537，R²= 0.9996

1、按照蛋白浓度计箖�/span>

酶活性定义：�?0℃，pH6.0条件下，每毫克蛋白每小时分解果胶酸产�?mg半乳糖醛酸为一个酶活力单位、�/span>

PG活�?mg/h/mg prot)=(△A+0.1537)÷0.1544 ×V反总�?V样×Cpr)÷T= 129.53×(△A+0.1537)÷Cpr

2、按照样本质量计箖�/span>

酶活性定义：�?0℃，pH6.0条件下，每克样本每小时分解果胶酸产生1mg半乳糖醛酸为一个酶活力单位、�/span>

PG活�?mg/h/g)=(△A+0.1537)÷0.1544×V反总�?V样×W÷V样�?÷T= 129.53×(△A+0.1537)÷W

3、按液体体积计算

酶活性定义：�?0℃，pH6.0条件下，每毫升培养液每小时分解果胶酸产生1mg半乳糖醛酸为一个酶活力单位、�/span>

PG活�?mg/h/ml)=(△A+0.1537)÷0.1544×V反总÷V样÷T= 129.53×(△A+0.1537)

4、按细胞数量计算

酶活性定义：�?0℃，pH6.0条件下，�?04个细胞每小时分解果胶酸产�?mg半乳糖醛酸为一个酶活力单位、�/span>

PG活�?mg/h/10⁴cell)=(△A+0.1537)÷0.1544×V反总�?V样×细胞数量÷V样�?÷T=129.53×(△A+0.1537)÷细胞数量

V反总：反应总体积，1ml；V样：反应中样本体积，0.1ml；V样总：加入提取液体积，1ml；Cpr：样本蛋白浓度，mg/ml；W，样本质量，g；T：反应时间，0.5h、�/span>

注意事项９�/span>

1、测定之前请先做预实验，如果吸光值较高或较低，请用提取液做适当的稀释或者加大样本量，并在计算公式中乘以稀释倍数或者以实际加入的样本体积参与计算、�/span>

2、煮沸样本建议将样本在沸水中煮沸10分钟，以将酶彻底灭活、�/span>