注意：正式测定前务必�2-3个预期差异较大的样本做预测定、�/span>

多聚半乳糖醛酸酶(Ploygalacturonase, PG)属果胶酶的一种，广泛存在于植物、细菌及真菌中。其催化多聚半乳糖醛酸分解，在果实软化、花粉授粉、种子发育成熟及器官脱落等方面具有重要作用，并且病原菌在侵染宿主植物时，可分泌多聚半乳糖醛酸酶来降解宿主细胞壁，进而导致病程发展、�/span>

PG水解多聚半乳糖醛酸生成半乳糖醛酸，半乳糖醛酸与DNS试剂反应生成�?40 nm有特征吸收峰的棕红色物质，测�?40 nm处吸光值变化可计算得果胶酶活性、�/span>

产品内容９�/span>

提取液：液体60ml×1瓶，4℃保存、�/span>

试剂一：液�?0ml×1瓶，4℃保存。若溶液中有晶体析出�?7℃水浴溶解、�/span>

试剂二：粉剂×1瓶，4℃避光保存。临用前加入10 ml蒸馏水，60℃水浴助溶、�/span>

试剂三：液体20ml×1瓶，4℃避光保存、�/span>

标准品：粉剂×1支，10 mg半乳糖醛酸，4℃保存。临用前加入0.943 ml蒸馏水，配成50 μmol/ml的标准液、�/span>

需自备的仪器和用品９�/span>

天平、低温离心机、可见分光光度计�? ml玻璃比色皿、恒温水浴锅、�/span>

操作步骤９�/span>

一、粗酶液提取 ９�/span>

组织：按照质�?g):蒸馏水体�?ml)�? : 5�?0的比�?建议称取�?.1 g，加�?ml提取�?加入提取液，冰浴匀浆后�?℃，16000 g，离�?0 min，取上清置于冰上待测、�/span>

细菌：先收集细菌到离心管内，离心后弃上清；按照细菌数�?10 4�?︰提取液体积(ml)�?00�?00�?的比�?建议500万个细菌加入1 ml提取�?，冰浴超声波破碎细菌(功率20%�?00W，超�? s，间�? s，总时�?min)；然�?℃，16000 g，离�?0 min取上清置于冰上待测、�/span>

液体：直接检测或用提取液稀释后检测、�/span>

二、测定步� ９�/span>

1、分光光度计/酶标仪预�?0min以上，调节波长至540nm，蒸馏水调零、�/span>

2、将50 μmol/ml标准液稀释为6�?�?�?�?�?.5 μmol/ml的标准溶液备用、�/span>

3、操作表�?�?.5ml离心管中)

二、测定操作表

试剂名称(μL)	测定箠�/span>	对照箠�/span>	空白箠�/span>	标准箠�/span>
样本	25	25	-	-
煮沸样本	-	-	25	-
标准溶液	-	-	-	25
试剂一	50	50	50	50
试剂事�/span>	50	-	50	50
40℃水浴准确反� 2 h后，沸水浴加� 10 min(盖紧，防止水分散�?，取出后冷却至室温、�/span>
试剂事�/span>	-	50	-	-
试剂丈�/span>	125	125	125	125
沸水浴加�?min(盖紧，防止水分散�?，取出后冷却至室温、�/span>
吸取200μL反应液，测定540 nm处的吸光度，记为A测定管、A对照管、A空白管、A标准管，计算ΔA=A测定�?A对照管，ΔA标准=A标准�?A空白管。每个测定管需设一个对照管、�/span>

三、PG酶活计算 ９�/span>

1、标准曲线的绘制９�/span>

以各个标准溶液的浓度� x轴，其对应的ΔA标准� y轴，绘制标准曲线，得到标准方程y= kx+b，将ΔA带入方程得到 x(μmol/ml)

2� PG酶活的计算：

(1)按蛋白浓度计箖�/span>

酶活定义：在40℃，pH 6.0的条件下，每毫克蛋白每小时分解多聚半乳糖醛酸产生1 μmol的半乳糖醛酸定义为一个酶活力单位、�/span>

PG酶活(U/ mg prot)= x×V提取÷(V提取×Cpr)÷T = 0.5x÷Cpr

(2)按样本质量计箖�/span>

酶活定义：在40℃，pH 6.0的条件下，每克样品每小时分解多聚半乳糖醛酸产�? μmol的半乳糖醛酸定义为一个酶活力单位、�/span>

PG酶活(U/ g鲜重)= x×V提取÷W÷T = 0.5x÷W

(3)按照细菌数量计算

酶活定义：在40℃，pH 6.0的条件下，每10 4个细菌每小时分解多聚半乳糖醛酸产�? μmol的半乳糖醛酸定义为一个酶活力单位、�/span>

PG酶活(U/ 10 4 cell)= x×V提取÷T÷细菌数量(万个)=0.5x÷细菌数量(万个)

(4)按液体体积计箖�/span>

酶活定义：在40℃，pH 6.0的条件下，每ml样本每小时分解多聚半乳糖醛酸产生1 μmol的半乳糖醛酸定义为一个酶活力单位、�/span>

PG酶活(U/ ml)= x×V样÷V样÷T = 0.5x

V提取：加入提取液体积�? ml；Cpr：样本蛋白浓度，mg/ml；W：样本质量，g；V样：反应体系中样本体积，0.025 ml；T：酶促反应时间，2 h、�/span>

注意事项９�/span>

1、样本提取上清液置于冰上待测，且样本提取完成后建议当天提取当天内测完、�/span>

2、当A大于2时，建议将样品用提取液稀释后再进行测定，并在计算公式中乘以相应稀释倍数、�/span>

3、植物果实组织建议将样本稀�?0倍或20倍后再测定、�/span>

4、若样本ΔA值偏小，建议延长酶促反应时间，并在计算公式中除以相应时间、�/span>