SOD(EC 1.15.1.1)是一种广泛存在于生物体内的金属酶，是重要的氧自由基清除剂，能催化超氧化物阴离子发生岐化作用，生成H₂O₂和O₂。SOD不仅是超氧化物阴离子清除酶，也是H₂O₂主要生成酶，在生物抗氧化系统中具有重要作用。通过黄嘌呤及黄嘌呤氧化酶反应系统产生超氧阴离�?O₂^-)，O₂^-可还原氮蓝四唑生成蓝色甲臜，后者在560nm处有吸收；SOD可清除O₂^-，从而抑制了甲臜的形成；反应液蓝色越深，说明SOD活性愈低，反之活性越高、�/span>

注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测、�/span>

产品组成９�/span>

试剂名称	规格	保存条件
提取涱�/span>	液体60ml×2瓵�/span>	4ℂ�/span>
试剂一	液体15ml×1瓵�/span>	4ℂ�/span>
试剂事�/span>	液体160μL×1�?/span>	4ℂ�/span>
试剂丈�/span>	液体11ml×1瓵�/span>	4ℂ�/span>
试剂囚�/span>	粉剂×1�?/span>	4ℂ�/span>
试剂亓�/span>	液体2ml×1瓵�/span>	4ℂ�/span>

溶液的配制：

1.试剂二：使用前先离心再吹打混匀、�/span>

2.试剂五：临用前将试剂四加入试剂五中，并震荡溶解、�/span>

需自备的仪器和用品９�/span>

可见分光光度计、台式离心机、可调式移液器�?ml玻璃比色皿、研�?匀浆器、冰和蒸馏水、�/span>

操作步骤９�/span>

一、样本处�?可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文�?

1.细菌或培养细胞样本：收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清，按照细菌或细胞数�?104�?：提取液体积(ml)�?00-1000:1的比�?建议500万细菌或细胞加入1ml提取�?，超声波破碎细菌或细�?冰浴，功�?0%�?00W，超�?s，间�?0s，重�?0�?�?000g 4℃离�?0min，取上清，置冰上待测、�/span>

2.组织样本：按照组织质�?g)：提取液体积(ml)�?:5-10的比�?建议称取�?.1g组织，加�?ml提取�?，进行冰浴匀浆；8000g 4℃离�?0min，取上清，置冰上待测、�/span>

3.血�?�?样本：直接检测、�/span>

二、测定步驞�/span>

1.分光光度计预�?0min以上，调节波长至560nm，蒸馏水调零、�/span>

2.测定前将试剂一、三和五37�?哺乳动物)�?5�?其它物种)水浴5min以上、�/span>

3.样本测定(在EP管中加入下列试剂)

试剂名称(μL)	测定箠�/span>	对照箠�/span>	空白�?	空白�?
样本	90	90	-	-
试剂一	240	240	240	240
试剂事�/span>	6	-	6	-
试剂丈�/span>	180	180	180	180
蒸馏氳�/span>	480	486	570	576
试剂亓�/span>	30	30	30	30

充分混匀�?7℃水�?0min后，置于1ml玻璃比色皿测�?60nm下的吸光度，分别记为A测定、A对照、A1空白、A2空白，计算ΔA测定=A测定-A对照，ΔA空白=A1空白-A2空白。如底部有沉淀，混匀后再行测定� (空白�?和空白管2各只需�?�?管，每个样本有一个对照管)

三、SOD活性计箖�/span>

1.抑制百分率的计算９�/span>

抑制百分玆�(ΔA空白-ΔA测定)÷ΔA空白× 100%

尽量使样本的抑制百分率在30-70%范围内，越靠�?0%越准确。如果计算出来的抑制百分率小�?0%或大�?0%，则通常需要调整加样量后重新测定。如果测定出来的抑制百分率偏高，则需适当稀释样本；如果测定出来的抑制百分率偏低，则需重新准备浓度比较高的待测样本、�/span>

2.SOD酶活性单位：在上述黄嘌呤氧化酶偶联反应体系中抑制百分率为50%时，反应体系中的SOD酶活力定义为一个酶活力单位、�/span>

3.SOD酶活性计算：

(1)血�?�?SOD活�?U/ml)=[抑制百分率�?1-抑制百分�?×V反总]÷V样×F=11.4×抑制百分率�?1-抑制百分�?×F

(2)组织、细菌或培养细胞SOD活力计算９�/span>

A按样本蛋白浓度计算SOD活� (U/mg prot)=[抑制百分率�?1-抑制百分�?×V反总]÷(V样×Cpr)×F=11.4×抑制百分率�?1-抑制百分�?÷Cpr×F

B按样本质量计算SOD活�?U/g质量)=[抑制百分率�?1 -抑制百分�?×V反总]÷(W×V样÷V样�?×F=11.4×抑制百分率�?1-抑制百分�?÷W×F

C按细菌或细胞数量计算 SOD活力(U/10⁴cell)= [抑制百分率�?1-抑制百分�?×V反总]÷(500×V样÷V样�?×F=0.0228×抑制百分率�?1-抑制百分�?×F

V反总：反应体系总体积，1.026ml；V样：加入反应体系中样本的体积�?.09ml；V样总：加入提取液体积，1ml；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/ml；W：样本质量，g�?00：细胞或细菌总数�?00万，F：样本稀释倍数、�/span>

注意事项９�/span>

1.样本和试剂二使用时在冰上放置、�/span>

2.样本较多时，可按表格配制工作�?包含试剂一、二、三)，试剂五必须最后加入、�/span>

3.反应完成后，可能有沉淀生成，混匀后测定即可、�/span>