正式测定前取 2-3个预期差异较大的样本做预测定

测定意义９�/span>

生物碱存在于自然�?主要为植物，但有的也存在于动�?中的一类含氮的碱性有机化合物，大多数有复杂的环状结构，氮素多包含在环内，有显著的生物活性，是中草药中重要的有效成分之一、�/span>

测定原理９�/span>

生物碱与溴甲酚绿指示剂反应，生成绿色化合物，� 416nm处有最大吸收峰、�/span>

需自备的仪器和用品９�/span>

酶标仪、水浴锅、超声波清洗器、可调式移液器�?6孔板、研钵�?0%乙醇、氯仿和蒸馏水、�/span>

试剂的组成和配制９�/span>

试剂一：液� 12mL×1瓶，4℃保存；

试剂二：液体 30mL ×1瓶，4℃保存；

试剂三：液体 15mL ×1瓶，4℃避光保存；

生物碱的提取９�/span>

样本烘干粉碎，过 80目筛。称取约 0.1g样本，加� 0.1mL试剂一，再加入 0.9mL80%乙醇，充分混匀后转移到 EP管中，超声波提取 60min� 8000 g�?5℃离� 10 min，取上清液待测。另取空 EP管，加入 0.1mL试剂一� 0.9mL80%乙醇，混匀后作为空白液、�/span>

测定步骤９�/span>

1、酶标仪预热 30min以上，调节波长至 416nm处、�/span>

2、操作表：在 EP管中加入如下试剂

试剂名称(μL)	空白箠�/span>	测定箠�/span>
样本		50
空白涱�/span>	50
试剂事�/span>	250	250
试剂丈�/span>	100	100
混匀，室温静� 5min
氯仿	500	500

剧烈振荡混匀，室温静� 40min，吸取下层氯仿层 200μL� 96孔板�?16nm处读取吸光� A，ΔA=A测定-A空白，空白管只要做一管、�/span>

生物碱含量计算：

标准条件下测定的回归方程� y = 1.915x - 0.0005，R²= 0.9942；x为标准品浓度(mg/mL)，y� ΔA、�/span>

生物碱含�?mg/g干重)=(ΔA+0.0005)÷1.915×V样总÷W=0.522×(ΔA+0.0005)÷W

V样总：加入提取液体积，1mL；W：样本鲜重，g、�/span>