产品介绍
正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定 测定意义９/strong> 高铁还原?ferric-chelate reductase,FCR)催化高价铁螯合物中的 Fe3+还原 Fe2+，在部分物种铁元素的吸收中有重要作用、/span> 测定原理９/strong> FCR 催化 Fe3+还原 Fe2+，Fe2+ ferrozine 反应显色，在 562nm 下有特征吸光值、/span> 自备用品９/strong> 可见分光光度?酶标仪、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研钵、冰和蒸馏水、/span> 试剂组成和配制： 试剂一：液 6mL×1 瓶，4℃避光保存； 试剂二：液体 6mL×1 瓶，4℃避光保存； 试剂三：液体 6mL×1 瓶，4℃保存、/span> 粗酶液提取： 按照组织质量(g)：水 mL) 1??0 的比?建议称取 0.1g 组织，加 1mL 蒸馏?，进行冰浴匀浆?0000g 4℃离 10min，取上清，置冰上待测、/span> 测定步骤９/strong> 1 分光光度计或酶标仪预 30min 以上，调节波长至 562nm，蒸馏水调零、/span> 2 工作液配制：将试剂一、二、三 1:1:1 的比例混合。临用前配制，用多少配多少、/span> 3 在微量石英比色皿/96 孔板中，加入 50μL 样本上清 150μL 工作液，混匀，记录初始吸光 A1 30min 后的吸光 A2。ΔA=A2-A1、/span> FCR 活性计箖a.用微量石英比色皿测定的计算公式如上/strong> 标准曲线：y = 8.0014x + 0.0011，R2 = 0.9997：/span> (1)按样本质量计箖/span> 单位定义：每 g 样本每分钟产 1nmolFe2+-ferrozine 定义为一个酶活力单位、/span> FCR(nmol/min/g 鲜重)=(△A-0.0011)÷8.0014×1000×V 标?V 样÷V 样总×W)÷T=4.166×(△A-0.0011)÷W (2)按样本蛋白浓度计箖/span> 单位定义：每 mg 蛋白每分钟产 1nmolFe2+-ferrozine 定义为一个酶活力单位、/span> FCR(nmol/min/mg prot)=(△A-0.0011)÷8.0014×1000×V 标?V 样÷V 样总×Cpr)÷T=4.166×(△A-0.0011)÷Cpr V 样总：加入提取液体积，1 mL；V 样：反应中样品体积，50μL；V 标：加入标准品体 ?0μL；T：反应时间，30min；W：样品质量，g；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL?000，μmol nmol 的转换系数、/span> b. 96 孔板测定的计算公式如上/strong> 标准曲线：y = 4.0007x + 0.0011，R2 = 0.9997；y，吸光度 (1)按样本质量计箖/span> 单位定义：每 g 样本每分钟产 1nmolFe2+-ferrozine 定义为一个酶活力单位、/span> FCR(nmol/min/g 鲜重)=(△A-0.0011)÷4.0007×1000×V 标?V 样÷V 样总×W)÷T=8.331×(△A-0.0011)÷W (2)按样本蛋白浓度计箖/span> 单位定义：每 mg 蛋白每分钟产 1nmolFe2+-ferrozine 定义为一个酶活力单位、/span> FCR(nmol/min/mg prot)=(△A-0.0011)÷4.0007×1000×V 标?V 样÷V 样总×W)÷T=8.331×(△A-0.0011)÷Cpr V 样总：加入提取液体积，1 mL；V 样：反应中样品体积，50μL；V 标：加入标准品体 ?0μL；T：反应时间，30min；W：样品质量，g；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL?000，μmol nmol 的转换系数、/span> |
相关产品
|
 |
|
