正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定

测定意义９�/span>

高铁还原�?ferric-chelate reductase,FCR)催化高价铁螯合物中的 Fe3+还原� Fe2+，在部分物种铁元素的吸收中有重要作用、�/span>

测定原理９�/span>

FCR 催化 Fe3+还原� Fe2+，Fe2+� ferrozine 反应显色，在 562nm 下有特征吸光值、�/span>

自备用品９�/span>

可见分光光度计、台式离心机、可调式移液器�?mL 玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水、�/span>

试剂组成和配制：

试剂一：液� 15mL×1 瓶，4℃避光保存；

试剂二：液体 15mL×1 瓶，4℃避光保存；

试剂三：液体 15mL×1 瓶，4℃保存、�/span>

粗酶液提取：

按照组织质量(g)：水 mL)� 1�?�?0 的比�?建议称取� 0.1g 组织，加� 1mL 蒸馏�?，进行冰浴匀浆�?0000g 4℃离� 10min，取上清，置冰上待测、�/span>

测定步骤９�/span>

1� 分光光度计或酶标仪预� 30min 以上，调节波长至 562nm，蒸馏水调零、�/span>

2� 工作液配制：将试剂一、二、三� 1:1:1 的比例混合。临用前配制，用多少配多尐�/span>

3� � 1mL 玻璃比色皿中，加� 250μL 样本上清� 750μL 工作液，混匀，记录初始吸光值A1 � 30min 后的吸光� A2。ΔA=A2-A1、�/span>

FCR 活性计算公式：

标准曲线：y = 8.0014x + 0.0011，R2 = 0.9997：�/span>

(1)按样本质量计箖�/span>

单位定义：每 g 样本每分钟产� 1nmolFe2+-ferrozine 定义为一个酶活力单位、�/span>

FCR(nmol/min/g 鲜重)=(△A-0.0011)÷8.0014×1000×V 标�?V 样÷V 样总×W)÷T=4.166×(△A-0.0011)÷W

(2)按样本蛋白浓度计箖�/span>

单位定义：每 mg 蛋白每分钟产� 1nmolFe2+-ferrozine 定义为一个酶活力单位、�/span>

FCR(nmol/min/mg prot)=(△A-0.0011)÷8.0014×1000×V 标�?V 样÷V 样总×Cpr)÷T=4.166×(△A-0.0011)÷Cpr

V 样总：加入提取液体积，1 mL；V 样：反应中样品体积，250μL；V 标：加入标准品体� �?50μL；T：反应时间，30min；W：样品质量，g；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL�?000，μmol� nmol 的转换系数、�/span>