产品介绍
意义：脂蛋白酯酶 (Lipoprotein lipase, LPL) 是脂肪细胞、心肌细胞、骨骼肌细胞、乳腺细胞及巨噬 胞等实质细胞合成的一种酶，可催化甘油三脂水解为脂肪酸和单酸甘油酯，以供组织氧化供能和贮存，并 在不同的组织表现出不同的生理意义、/p> 原理：脂蛋白酯酶水解 4-硝基苯棕榈酸酯产 4-硝基苯酚，在 400nm 有特征吸收峰、/p> 检测方法：微量泔/strong> 产品组成及保存条件：
正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定、/p> 自备用品９/strong> 天平、冷冻离心机、研钵、水浴锅、可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96 孔板、冰、丙酮和蒸馏水、/p> 粗酶提取９/strong> 1. 组织：按照质?g)：AK237-A 体积(mL) 1??0 的比?建议称取 0.1g，加 1mL AK237- A)加入 AK237-A，冰浴匀浆后 4℃，10000g 离心 10min，取上清置冰上待测、/p> 2. 细胞：按照细胞数?104 ?：AK237-A 体积(mL) 500?000? 的比?建议 500 万细 加入 1mL AK237-A)加入 AK237-A，冰浴超声波破碎细胞(功率 300w，超 3 秒，间隔 7 秒， 总时 3min)；然后于 4℃，10000g 离心10min，取上清待测、/p> 3. 血清：直接测定、/p> 测定步骤９/strong> 1. 分光光度?酶标仪预 30min，调节波长到 400 nm，蒸馏水调零、/p> 2. 5μmol/mL 标准液用 AK237-A 稀 16 倍至 0.3125μmol/mL 的标准溶液备用、/p> 3. 1.5mL 离心管中依次加入下列试剂９/p>
充分混匀放置 2min 后，对照管和测定 8000g 常温离心 10min，取 200μL 对照 管和测定管的上清、标准管和空白管于微量玻璃比色皿/96 孔板中测 400nm 处吸光值，记为 A 对照管、A 测定管、A 空白管、A 标准管，ΔA=A 测定? A 对照管，ΔA 标准=A 标准? A 空白管、/p>LPL 活性计算公式： 1 血??LPL 活力计算９/p> 单位定义：在 45℃，pH7.5 条件下，每毫升血清每分钟水解产生 1nmol 4-硝基苯酚为一个酶活力单位、/p> LPL(U/mL)=ΔA÷(ΔA 标准÷C 标准)÷T×1000=31.25×ΔA÷ΔA 标准 2 组织、细菌或细胞 LPL 活力计算９/p> (1)按样本质量计算： 单位定义：在 45℃，pH7.5 条件下，每克组织每分钟水解产 1nmol 4-硝基苯酚为一个酶活力单位、/p> LPL(U/g 质量)=ΔA÷(ΔA 标准÷C 标准)×V 提取÷W÷T×1000=31.25×ΔA÷ΔA 标准÷W (2)按样本蛋白浓度计算： 单位定义：在 45℃，pH7.5 条件下，每毫克蛋白每分钟水解产生 1nmol 4-硝基苯酚为一个酶活力单位、/p> LPL(U/mg prot)=ΔA÷(ΔA 标准÷C 标准)×V 提取÷(V 提取×Cpr)÷T×1000=31.25×ΔA÷ΔA 标准÷Cpr (3)按细菌或细胞数量计算９/p> 单位定义：在 45℃，pH7.5 条件下， 104 个细胞每分钟水解产生 1nmol 4-硝基苯酚为一个酶活力 位、/p> LPL(U/104 cell)=ΔA÷(ΔA 标准÷C 标准)×V 提取÷500÷T×1000=0.0625×ΔA÷ΔA 标准 C 标准：标准溶液浓度，0.3125μmol/mL；V 提取：加 AK237-A 体积?mL；T：反应时间，10min Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g?00：细菌或细胞总数?00 万；1000：单位换 系数?μmol=1000nmol、/p> 注意事项９/strong> 1. AK237-C 加入混匀后静置两分钟立即测定，否则影响吸光值、/p> 2. 测定管加 AK237-B 后变浑浊为正常现象、/p> 3. 吸光值过高或者测定结果不稳定，则将粗酶液进行适当的稀释，并在计算公式中乘以稀释倍数、/p> |
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