收到细胞后，在倒置显微镜下观察整个细胞生长情况９/span> 如果细胞未长满，?5%酒精喷洒整个瓶消毒后放到超菌台内，严格无菌操作，打开细胞培养瓶，吸出培养液，?0ml新鲜培养液后继续培养、/span> 如果细胞已长??0-90%)，即可进行传代培养。具体步骤如下： 1. 弃去培养液，用不含钙、镁离子的PBS?-2次、/span> 2. ?ml消化?0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中，倒转放于37℃培养箱1-3分钟预热，然后将培养瓶翻过来让胰酶与细胞面接触大?0-30秒后，在倒置显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量完全培养基终止消化、/span> 3. ?-8ml/?25cm2)补加完全培养基，轻轻打匀后吸出一半，分到新的培养瓶中。如果没有特别说明，收到细胞后的**次传代一般是一传二、/span> 注：1、观察细?*在低倍镜(4?X物镜)下进行，否则不能准确判断细胞的传代密度。看细胞的形态请?0X?0X物镜下、/span> 2、瓶中运输培养基不能重复再用,请换用加双抗的新培养基，细胞冻存?培养基中可不加任何抗生素、/span> 3、有些细胞贴壁不牢，如发现贴壁细胞有脱落，可离心吹打后接种到新瓶内、/span> 4、收到细胞后，若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染，请及时与我们联系、/span> |
