收到细胞后,在倒置显微镜下观察整个细胞生长情况9/span> 如果细胞未长满,?5%酒精喷洒整个瓶消毒后放到超菌台内,严格无菌操作,打开细胞培养瓶,吸出培养液,?0ml新鲜培养液后继续培养、/span> 如果细胞已长??0-90%),即可进行传代培养。具体步骤如下: 1.弃去培养液,用不含钙、镁离子的PBS?-2次、/span> 2.?ml消化?0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养瓶中,倒转放于37℃培养箱1-3分钟预热,然后将培养瓶翻过来让胰酶与细胞面接触大?0-30秒后,在倒置显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加少量完全培养基终止消化、/span> 3.?-8ml/?25cm2)补加完全培养基,轻轻打匀后吸出一半,分到新的培养瓶中。如果没有特别说明,收到细胞后的**次传代一般是一传二、/span> 注:1、观察细?*在低倍镜(4?X物镜)下进行,否则不能准确判断细胞的传代密度。看细胞的形态请?0X?0X物镜下、/span> 2.收到细胞后,若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染,请及时与我们联系、/span> |