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地衣形芽孢杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒
地衣形芽孢杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒图片
包装: 50次
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半岛bd体育手机客户端 别名: Bacillus licheniformis Probe qPCR Kit
半岛bd体育手机客户端 介绍

半岛bd体育手机客户端 及特点

地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)是一种在土壤中常见的革兰氏阳性嗜热细菌。在鸟类,特别是居住在地面的鸟类(如雀科)和水生的鸟类(如鸭)的羽毛中也能找到这种细菌,特别是在其胸部和背部的羽毛中。酶分泌的最适温度为37℃。它可能以孢子形式存在,从而抵抗恶劣的环境;在良好环境下,则可以生长态存在。该细菌可调整菌群失调达到医疗目的,可促使机体产生抗菌活性物质、杀灭致病菌。能产生抗活性物质,并具有独特的生物夺氧作用机制,能抑制致病菌的生长繁殖。

因此快速检测地衣芽孢杆菌具有重要意义。本半岛bd体育手机客户端 就是以探针法荧光定量 PCR技术为基础开发的专门检测地衣芽孢杆菌的试剂盒,它具有下列特点:

1、即开即用,用户只需要提供样品 DNA模板。

2、引物和探针经过优化,灵敏性高。

3、提供阳性对照,便于区分假阴性样品。

4、特异性高,引物是根据地衣芽孢杆菌通用高度保守区设计。

5、本半岛bd体育手机客户端 足够 50次 20μL体系的探针法荧光定量 PCR反应。

6、本半岛bd体育手机客户端 只能用于科研。

规格及成分

成份

编号

五孔盒包装

2×Probe qPCR MagicMix

190303

500μL(本色盖)

荧光 PCR专用模板稀释液

180701

1mL(黄盖)

地衣芽孢杆菌探针法

qPCR引物-探针混合液

15-25470yp

150μL(棕色管)

地衣芽孢杆菌qPCR阳性对照(1×107拷贝/μL)

pc25470

50μL(黄盖)

使用手册

15-25470sc

1份

运输及保存

低温运输,-20℃保存,保存期限为 12个月。

自备试剂

样品 DNA。

使用方法

一、稀释PCR阳性对照(以10E1-106拷贝/μL这6个10倍稀释度为例)

如果做定性实验,则此步可以跳过。如果做定量实验,则需要稀释阳性对照做标准曲线。由于标准品浓度非常高,因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行,千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分。本半岛bd体育手机客户端 只提供 DNA片段作为阳性对照。

1.标记 6个离心管,分别为 6,5,4,3,2,1。

2、用带芯枪头分别加入 45μL荧光 PCR专用模板稀释液(**用带芯枪头,下同)。

3、在 6号管中加入 5μL 1×107拷贝/μL的阳性对照(试剂盒提供),充分震荡 1分钟,得 1×106拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。

4、换枪头,在 5号管中加入 5μL 1×106拷贝/μL的阳性对照(上步稀释所得),充分震荡1分钟,得 1×105拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。

5、换枪头,在 4号管中加入 5μL 1×105拷贝/μL的阳性对照(上步稀释所得),充分震荡 1分钟,得 1×104拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。

6、重复上面的操作直到得到 6个稀释度的标准曲线样品。放冰上用。

二、样品 DNA的制备

7、如果有 N个样品,必须设置 N+2个提取,多出的一个是样品制备 PC(样品制备阳性对照),一个是样品制备 NC(样品制备阴性对照)。可以用 10μL阳性对照的 10000倍稀释液再加上一定量的水使总体积跟每次制备要求的体积一样,以此作为样品制备 PC。另外用水作为样品制备 NC。

8、用自选方法纯化样品的 DNA,本试剂盒跟市场上大多数 DNA提取试剂盒兼容。

三、Probe qPCR反应(20μL体系,在样品制备室进行)

9、如果做定量分析并且只做1次重复,则标记 N+9个PCR管,其中N+2个用于上步得到的N+2个样品,1个用于 PCR阴性对照(用水做模板),6个用于标准曲线。如果做定性分析,并且只做1次重复,则标记 N+4个 PCR管,其中 N+2个用于上步得到的 N+2个样品,1个用于PCR阴性对照(用水做模板),1个用于 PCR阳性对照(用第4号管中的阳性对照稀释液做模板)。下面只以定量分析为描述操作步骤,

10、在标记管中按下表加入各成分(本表只列出一次重复。样品管和阴性对照设置完毕后才设置阳性对照,并且阳性对照样品要等所有管子盖上盖子储存好后最后加):

成分

样品管

N+2个

PCR阴性对照管

标准曲线

样品管(1-6管)

2×Probe qPCR MagicMix

10μL

10μL

各 10μL

地衣芽孢杆菌探针法qPCR引物混合液-探针混合液

3μL

3μL

各 3μL

N+2个待测 DNA模板

7μL

不加

不加

超纯水

不加

7μL

不加

第 6步所得标准曲线样品稀释液(1-6号)

不加

不加

各7μL(1号样到1号管,2号样到2号管…)

11、盖上盖子后上机,按下面参数进行 PCR:

过程

温度

时间

预变性

95℃

5min

qPCR反应

(40个循环)

95℃

15sec

60℃

1min(采集 FAM通道的荧光信号)

四、数据处理

12、如果把本试剂盒用于定量检测,则以阳性对照浓度的 log值为横轴,以 Ct值为纵轴,绘制标准曲线。再以待测样品的 Ct值从标准曲线上推算出样品 DNA浓度的 log值,再推算出其浓度。

13、如果把本试剂盒用于定性检测,只判断阳性或阴性,则阴性对照 Ct必须大于或等于 40。阳性对照必须有荧光对数增长,有典型扩增曲线,Ct值应该小于或等于 35。对待测样品,如果其 Ct大于或等于 40则为阴性,如果小于或等于 35则为阳性。如果在 35-40之间,则重复一次。重复实验的 Ct值如果大于或等于 40则为阴性,如果小于 40,则为阳性。

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