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PCR/RT-PCR >> PCR试剂盒
烟曲霉PCR试剂盒
烟曲霉PCR试剂盒图片
包装: 50次
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半岛bd体育手机客户端 别名: Aspergillus fumigatus PCR Kit
半岛bd体育手机客户端 介绍

半岛bd体育手机客户端 及特点

烟曲霉(Aspergillusfumigatus.)属壳霉目、杯霉科、烟曲霉属,是一种重要的致病菌,也是引起食品腐败的一种真菌。烟曲霉的菌落生长迅速,绒状或作一定的絮状,暗烟绿色,老后色变得更深。此菌嗜高温,在 45℃或更高的温度下生长茂盛。在粮食发热霉变的中期和后期常大量出现,促进粮温的升高和败坏。烟曲霉能寄生在人、鸟类及其它脊椎动物的肺部引起结核症。也能侵染棉铃和苹果等,引起果实腐烂,或寄藏于种子上。因此快速检测烟曲霉具有重要意义。本半岛bd体育手机客户端 就是为此目的根据 PCR原理开发的半岛bd体育手机客户端 ,它具有下列特点:

1、即开即用,用户只需要提供 DNA模板。

2、引物经过精心优化,专一性强,只扩增烟曲霉,但跟其他微生物无交叉反应。

3、提供阳性对照,便于区分假阴性样品。

4、PCR mix中含上样染料,PCR后可以直接上样电泳。

5、本试剂盒足够做 40μL体系的 PCR 50次。

6、本半岛bd体育手机客户端 只能用于科研。

规格及成分

成份 编号 十孔盒包装
PCR MagicMix 3.0 90805 1 mL(红盖)
超纯水 100935 1 mL(亮黄盖)
烟曲霉 PCR引物混合液 13-26720yw 100 μL(白盖)
烟曲霉 PCR阳性对照(1×108拷贝/μL) 60908-26720pc 50 μL(黄盖)
核酸释放剂试用装 61202 20次(1mL、绿盖
使用手册 13-26720sc 1份

运输及保存

低温运输,-20℃保存,保存期限为一年。阳性对照需要单独放置,不要污染其他试剂。

自备试剂

样品 DNA。

使用方法

一、样品 DNA的制备

1、如果有 N个样品,必须设置 N+2个提取,多出的一个是 PC(样品制备阳性对照),一个是 NC(样品制备阴性对照)。可以用 10μL阳性对照的10000倍稀释液再加上一定量的水使总体积跟每次制备要求的体积一样,以此作为 PC。另外用水作为 NC。

2、用自选方法纯化样品的 DNA,本试剂盒跟市场上大多数真菌 DNA提取试剂盒兼容。也可以选购本公司的柱式真菌 DNAout。本试剂盒免费赠送 20次免 DNA提取的核酸释放剂,本半岛bd体育手机客户端 的裂解液可以直接作为 PCR模板 ,省略了 DNA提取步骤。

二、设置 PCR反应(40 μL体系)

3、对 N+2个样品,在 PCR时需要增加一个 PCR阳性对照和一个 PCR阴性对照,故需要设置 N+4个反应。在 N+4个 PCR管中分别加入下列成分:

成分 N+2个样品管 PCR阴性对照管 PCR阳性对照管
PCR MagicMix 3.0 各 20 μL 20 μL 20 μL
烟曲霉 PCR引物混合液 各 2 μL 2 μL 2 μL
N+2个样品 DNA模板 各 18 μL - -
PCR阴性对照(超纯水) - 18 μL -
PCR阳性对照(烟曲霉 PCR阳性对照的 10000倍稀释液) - - 18 μL

4、按下表设置 PCR反应:

过程 温度 时间
预变性 95℃ 5 min
PCR反应(35个循环) 95℃ 30 sec
PCR反应(35个循环) 55℃ 30 sec
PCR反应(35个循环) 72℃ 60 sec
最后延伸 72℃ 10 min

三、电泳检测

5、取 10-20 μL PCR产物。电泳检测 PCR产物。本半岛bd体育手机客户端 提供的 PCR Mix在扩增结束后可以直接上样,不需要另外再加 loading buffer。预期的 PCR产物阳性对照必须有条带出现,阴性对照必须无任何扩增,否则实验无效。对没有扩增产物的样品,可以稀释 10倍后重复 PCR扩增以排除 PCR抑制剂的感染。

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