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PCR/RT-PCR >> PCR试剂盒
灭鲑气单胞菌PCR试剂盒
灭鲑气单胞菌PCR试剂盒图片
包装: 50次
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半岛bd体育手机客户端 别名: Aeromonas salmonicida Type2 PCR Kit
半岛bd体育手机客户端 介绍

半岛bd体育手机客户端 及特点

灭鲑气单胞菌(Aeromonas salmonicida)是气单胞菌属(Aeromonas)细菌的一个种 ,是引起鲑鳟鱼类疖疮病及溃疡病的最主要病原菌 ,给鲑科 (Salmonidae)鱼类养殖带来严重损失。近年来研究表明,该菌宿主范围逐渐扩大,可感染除了鲑科外的其他水产动物,如刺参、斑点叉尾鲙、乌鳢和大菱鲆等。对灭鲑气单胞菌的检测主要依赖于传统的微生物分离培养鉴定方法,其操作过程费时、繁琐,且很难得到准确结果,常常延误病情的诊断,而且对于已感染该菌但尚未发病的鱼类,通过常规分离鉴定方法很难得到准确结果本半岛bd体育手机客户端 是根据 PCR原理开发的灭鲑气单胞菌检测试剂盒,它具有下列特点:

1、即开即用,用户只需要提供 DNA模板。

2、引物经过精心优化,专一性强,只扩增灭鲑气单胞菌。

3、提供阳性对照,便于区分假阴性样品。

4、PCR mix中含上样染料,PCR后可以直接上样电泳。

5、本试剂盒足够做 40μL体系的 PCR 50次,但只能用于科研。

规格及成分

成份 编号 十孔盒包装
PCR Magic Mix 3.0 90805 1 mL(红盖)
超纯水 100935 1 mL(亮黄色)
灭鲑气单胞菌 PCR引物混合液 13-25330yw 100 μL(白盖)
灭鲑气单胞菌 PCR阳性对照(1×108拷贝/μL) 60908-25330pc 50 μL(黄盖)
使用手册 13-25330sc 1份

运输及保存

低温运输,-20℃保存,保存期限为一年。阳性对照需要单独放置,不要污染其他试剂。

自备试剂

样品 DNA。

使用方法

一、样品 DNA的制备

1、用自选方法纯化 N+2个样品的 DNA,本试剂盒跟市场上大多数核酸提取试剂盒兼容。

2、如果有 N个样品,则需要做 N+2个提取,包括一个样品制备阳性对照和一个样品制备阴性对照。样品制备阳性对照是在适量水(取决于试剂盒要求的样品起始量)中加 10μL灭鲑气单胞菌 PCR阳性对照的 10000倍稀释液而得,样品制备阴性对照是直接用水。提取结束后最后得到模板 DNA放冰上待用。

二、设置 PCR反应(40μL体系)

3、对 N+2个样品,在 PCR时需要增加一个 PCR阳性对照和一个 PCR阴性对照,故需要设置 N+4个反应。在 N+4个 PCR管中分别加入下列成分:

成分 N+2个样品管 PCR阴性对照 PCR阳性对照
PCR Magic Mix 3.0 各 20 μL 20 μL 20 μL
灭鲑气单胞菌 PCR引物混合液 各 2 μL 2 μL 2 μL
N+2个样品 DNA模板 各 18 μL - -
PCR阴性对照(水) - 18 μL -
PCR阳性对照(灭鲑气单胞菌 PCR阳性对照的10000倍稀释液) - - 18 μL

4、按下表设置 PCR反应:

过程 温度 时间
预变性 95℃ 5 min
PCR反应(35个循环) 95℃ 30 sec
PCR反应(35个循环) 55℃ 30 sec
PCR反应(35个循环) 72℃ 25 sec
最后延伸 72℃ 7 min

三、电泳检测

5、取 10-20 μL PCR产物。电泳检测 PCR产物。本半岛bd体育手机客户端 提供的 PCR Mix在扩增结束后可以直接上样,不需要另外再加loading buffer。PCR产物阳性对照必须有预期条带出现,阴性对照必须无任何扩增,否则实验无效。对没有扩增产物的样品,可以稀释 10倍后重复 PCR扩增以排除 PCR抑制剂的感染。

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