产品及特炸�/strong>

鲍肌肉萎缩症病毒(Abalone Shriveling Syndrome-associated Virus，AbSV)**在福建东山发现并在之后的几年里反复爆发病害。研究通过混养感染的方式将杂交鲍苗与注射该病毒的杂色鲍混养，结果表明，混养的方式可以是杂交鲍幼苗发病并致死，且感染 5天其死亡率高� 100%。该病毒作为一种已经被确定的鲍病病原，初次爆发后常有发病报道，且损失都很严重，几乎是毁灭性的，但是对于它的流行规律还没有相关报道，因此鲍肌肉萎缩症病毒的快速准确鉴定对该病的预防和检疫有着重要作用，为此本公司开发了简单快捷的鲍肌肉萎缩症病毒染料法荧光定� PCR检测试剂盒，它具有下列特点９�/span>

1.即开即用，用户只需要提供病毒样品、�/span>

2.根据鲍肌肉萎缩症病毒保守序列设计的专一性引物，与相关病毒无交叉反应、�/span>

3.灵敏度可以达到几百拷�?反应、�/span>

4.一管式荧光定量 PCR检测，避免后续污染、�/span>

5.本试剂盒足够 50� 20μL反应体系的荧光定� PCR、�/span>

6.本产品只适用于科研，不能用于临床诊断、�/span>

规格及成刅�/strong>

成分	编号	十孔盒包裄�/span>
2×qPCR MagicMix	90408	500μL(棕色�?
荧光 PCR专用模板稀释液	180701	1 mL(黄盖)
鲍肌肉萎缩症病毒 PCR引物混合�?/span>	14-51700yw	100μL(白盖)
鲍肌肉萎缩症病毒 PCR阳性对�?/span>(1×108拷贝/μL)	14-51700pc	50μL(红盖)
DNA病毒裂解�?试用�?	3674a	15�?9 mL)
使用手册	14-51700sc	1仼�/span>

运输及保字�/span>

低温运输�?20℃保存，有效期一年、�/span>

自备试剂

DNA模板�?0×ROX(根据机型决定，具体见使用方法)、�/span>

使用方法

一、稀� PCR阳性对�?� 10²-10⁷拷贝/μL� 6� 10倍稀释度为例)

1、注意：由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成�?。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活体样品做阳性对照，只提供可以直接使用的 DNA片段作为阳性对照、�/span>

2、标� 6个离心管，分别为 7�?�?�?�?�?、�/span>

3、用带芯枪头分别加入 45 μL荧光 PCR专用模板稀释液(**用带芯枪头，下同)、�/span>

4、在 7号管中加� 5 μL 1×10⁸拷贝/μL的阳性对照，充分震荡 1分钟，得1×10⁷拷贝/μL的阳性对照。放冰上待用、�/span>

5、换枪头，在 6号管中加� 5 μL 1×10⁷拷贝/μL的阳性对�?上步稀释所�?，充分震� 1分钟，得 1×10⁶拷贝/μL的阳性对照。放冰上待用、�/span>

6、换枪头，在 5号管中加� 5 μL 1×10⁶拷贝/μL的阳性对照到 5号管中，充分震荡 1分钟，得 1×10⁵拷贝/μL的阳性对照。放冰上待用、�/span>

7、重复上面的操作直到得到 6个稀释度的阳性对照。放冰上待用、�/span>

二、样� DNA的制夆�/span>

8、如果有 N个样品，必须设置 N+2个提取，多出的一个是 PC(样品制备阳性对�?，一个是 NC(样品制备阴性对�?。可以用 10μL上步制备� PCR阳性对照的� 4�?浓度� 1×10⁴拷贝/μL�?0μL相当� 1万拷�?或第 5�?浓度� 1×10⁵拷贝/μL�?0μL相当� 10万拷�?再加上一定量的水使总体积跟每次制备要求的体积一样，以此作为 PC。另外用水作� NC。如果每次制备需� 200μL样品，则 PC� NC的体积也必须� 200μL、�/span>

9、用自选方法纯化样品的 DNA，本试剂盒跟市场上大多数病毒 DNA提取试剂盒兼容。也可以选购本公司的一管式病毒 DNAout或其升级版柱式病� DNAout。本试剂盒免费赠�?5次一管式病毒 DNAout、�/span>

三、设� qPCR反应(20 μL体系，在样品制备室进�?

10、如果只� 1次重复，则标� N+9� PCR管，其中 N+2个用于上步得到的 N+2个样品，1个用� PCR阴性对照，6个用� PCR阳性对照。如果做 2-3次重复，则反应设置数量相应增� 2� 3倍、�/span>

11、在标记管中按下表加入各成分(本表只列出一次重复。样品管和阴性对照设置完比�/span>后才设置阳性对照，并且阳性对照样品要等所有管子盖上盖子储存好后最后加)９�/span>

成分	样品管N+2�?/span>	PCR阴性对照管	PCR阳性对照管(2-7�?
2×qPCR MagicMix(棕色�?	10 μL	10 μL	� 10 μL
鲍肌肉萎缩症病毒 PCR引物混合�?白盖)	2 μL	2 μL	� 2 μL
自备 10×ROX (见注)	2 μL	2 μL	� 2 μL
N+2待测样品 DNA模板	6 μL	不加	不加
� 7步所� PCR阳性对照稀释液(2-7�?	不加	不加	� 6μL(2号样�?号管�?号样� 3号管�?

�?� ABI7500�?700� 7900仪器需要使� ROX作为对照，其他荧� PCR�?/span>�?� iCycler IQ、MJ Option、MJ Chromo4、MX3000、MX4000、RotorGene3000、RotorGene 6000� LightCycler480)不需要使� ROX，则用水替代、�/span>

12、盖上盖子后上机，按下面参数进行 PCR(具体 PCR参数可以根据仪器不同而自行优�?、�/span>

过程	温度	时间
预变�?/span>	95ℂ�/span>	5分钟
PCR反应(30个循�?	94ℂ�/span>	60科�/span>
PCR反应(30个循�?	58ℂ�/span>	60科�/span>
PCR反应(30个循�?	72ℂ�/span>	60科�/span>

13、数据采雅�/span>

具体操作按所用仪器推荐的流程进行。本产品中所含的荧光染料在不结合 DNA时，最大吸收光谱在 471 nm，结� DNA时的最大吸收光谱在 500 nm，最大发射光谱在 530 nm。信号采集可以设置在复性或延伸步骤、�/span>

四、数据处琅�/span>

14、如果把本试剂盒用于定量检测，则以阳性对照浓度的 log值为横轴，以 Ct值为纵轴，绘制标准曲线。再以待测样品的 Ct值从标准曲线上推算出样品 DNA浓度� log值，再推算出其浓度、�/span>

15、如果把本试剂盒用于定性检测，只判断阳性或阴性，则阴性对� Ct必须大于或等� 40。阳性对照必须有荧光对数增长，有典型扩增曲线，Ct值应该小于或等于30。对待测样品，如果其 Ct大于或等� 40则为阴性，如果小于或等� 35则为阳性。如果在 35-40之间，则重复一次。重复实验的 Ct值如果大于或等于 40则为阴性，如果小于 40，则为阳性、�/span>