CelRed核酸染料特点
无毒性:CelRed 独特的油性和大分子量特点使其不能穿透细胞膜进入细胞内,艾姆斯氏试验结果也表明,该染料的诱变性远远小于EB、/span>
灵敏度高:适用于各种大小片段的电泳染色,对核酸迁移的影响小于SYBR Green I、/span>
稳定性高 适用于使用微波或其它加热方法制备琼脂糖凝胶;室温下在酸或碱缓冲液中极其稳定,耐光性强、/span>
信噪比高:样品荧光信号强,背景信号低、/span>
操作简单: EB 一样,在预制胶和电泳过程中染料不降解;而电泳后染色过程也只需30 分钟且无需脱色或冲 ,即可直接用紫外凝胶透射仪观察、/span>
适用范围广:可选择电泳前染?胶染?或电泳后染色(泡染?;适用于琼脂糖凝胶或聚丙烯酰胺凝胶电泳;可用于 dsDNA、ssDNA RNA 染色、/span>
与EB有相同的光谱特性,无需改变滤光片及观察装置:标准的 EB 滤光片或 SYBR 滤光片都适用,使用与观察EB相同的普通紫外凝胶透射仪观察即可, 300nm 紫外光附近可得到最佳激发。但是CelRed不能?88 nm氩离子激光器或相似波长的可见光完全激发,因此不推荐使用此类激发装置的成像系统。对于此类装置,我们推荐您使用CelGreen(Cat# 011?12),它和SYBR Green I的光谱相似,灵敏度相当,但更加稳定、/span>
CelRed使用方法简今/strong>
1、胶染法(用法同EB)(推荐方法)
(1) 制胶时加入CelRed 核酸染料(例如:每50mL 琼脂糖溶液中加入5μL CelRed 10,000× 储液+/span>
以此比例类推)、/span>
(2) 按照常规方法进行电泳、/span>
注意事项9/span>
此方法染色染料用量相对较少?00 μL染料大约可以?00 50mL的胶、/span>
由于CelRed具有良好的热稳定性,可以在热的琼脂糖溶液中直接添加,而不需要等待溶液冷却。摇晃,振荡或者翻转以保证染料充分混匀。也可以选择将CelRed储液加到琼脂糖粉末和电泳缓冲液中,然后用微波炉或其他常用方式加热以制备琼脂糖凝胶。CelRed兼容所有常用的电泳缓冲溶液、/span>
如果总是看到条带弥散或分离不理想,建议使用泡染法染色以确认问题是否与染料有关。如果染色后问题依旧存在,则说明问题与染料无关,请尝试:降低琼脂糖浓度;选用更长的凝胶;延长凝胶时间以保证边缘清晰;改进上样技巧或选择泡染法染色、/span>
此方法不适合预制聚丙烯酰胺凝胶,对于聚丙烯酰胺凝胶请使用泡染法、/span>
2、泡染法
(1) 按照常规方法进行电泳、/span>
(2) 用H2O将CelRed 10,000× 储液稀释约3,300倍到0.1M NaCl中,制成3× 染色液?例如?5μL CelRed 10,000× 储液?mL 1M NaCl加到45mL H2O?、/span>
(3) 将凝胶小心地放入合适的容器中,如聚丙烯容器中。缓慢加入足量的3× 染色液浸没凝胶。室温振荡染?0min左右,最佳染色时间根据凝胶厚度以及琼脂糖浓度不同而略有不同。对于含3.5?0%丙烯酰胺的凝胶,染色时间通常介于30min?h,并随丙烯酰胺含量增加而延长、/span>
用泡染法染色时,染料用量较多。单次使用的染色液可重复使用3次左右、/span>
3× CelRed染色液可以大量制备,在室温下避光保存直至用完、/span>
几种核酸染料比较
特别提醒9/strong>
如果您使用的是紫外成像仪,请选择CelRed;如果您使用激光成像仪或希望在可见光下观测,请选择 CelGreen、/span>
在极少数情况下,质粒经某些酶切后的DNA样品会出现拖尾和分辨率降低,此时建议同时尝试两种染色方法以决定哪种方法更加合适、/span>