CD40 免疫组化试剂监�/strong>

该试剂盒� HRP 标记的链霉亲和素复合物（HRP Streptavidin Conjugate＋�/p>

HRP-SA）为基础，可用于检测血�?细胞、组织内的特异� CD40 抗原。该试剂监�/p>

具有灵敏度高、特异性强、定性定位准确、背景清晰。在所用的 CD40 一抗与盷�/p>

应靶抗原结合后，用生物化二抗与一抗特异性结合，最后加� HRP-SA，形成抗

原—特异一抗—生物素化二抗—HRP-SA 复合物，显微镜下观察成像、�br/>

试剂盒所含试剂：

试剂 A 通透液�?.1% Triton-X 100 10 mL（选用�?nbsp;

试剂 B 封闭缓冲液（封闭用） 20 mL

试剂 C （原装进口分装）已稀释的即用� CD40 一抗（2.5ml�?nbsp;

试剂 D （原装进口分装）生物素化羊抗� IgG 1 �?nbsp;

（浓� 1.5 mg/mL，稀释比� 1:300~1:500�?0 μL+抗体稀释液 20ml

试剂 E HRP-SA 复合� 1 支（浓度 1 μM，稀释比 1:50~1:200�?00 μL

试剂 F DAB 显色� 5ml

用户自备试剂�?nbsp;

1� 10mM TBS（pH7.2~7.4�?nbsp;

三羟基氨基甲� 1.21g

氯化� 7.6g

加蒸馏水 800mL，浓盐酸� pH 值至 7.2~7.4，最后定容至 1000mL

TBS-T：TBS+Tween 20�?.05%体积比）

2．抗原修复液（依检测抗原不同而选择不同的修复液�?nbsp;

10mM pH6.0 柠檬酸缓冲液

柠檬� 0.38g

柠檬酸三� 2.45g

加蒸馏水 900mL，浓盐酸� pH 值至 6.0，最后定容至 1000mL

或：0.5M EDTA 修复液（pH8.0�?nbsp;

EDTA·2H2O 186.1g

加蒸馏水 700mL，用 10mM NaOH � pH 值至 8.0，最后定容至 1000Ml

3. 缓冲甘油封固� 10 mL

4. Tween 20 5 mL
石蜡包埋组织切片免疫染色

实验步骤（建议方桇�span style="white-space: pre;">）：

石蜡包埋组织切片 3~4μm 厚度

1.烤片� 将待做切片置于切片架上，� 60℃恒温烤箱中至少� 1 hr�?nbsp;

2.脱蜡� 切片放入盛有二甲苯的容器中脱� 3 次（即二甲苯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ），每次

10 min�?nbsp;

3.水化� 切片经下行酒精水化，无水乙醇 5min�?5%乙醇 2 次（每次 2min），85%

乙醇 2 min�?5%乙醇 2min，自来水冲洗，ddH2O � 2×2min�?nbsp;

4.抗原修复� 根据抗体说明书推荐方法进行抗原修复，常采用高压、微波（�?/p>

度达� 98~100℃）或酶消化修复法，室温自然冷却，自来水冲洗，ddH2O � 2×

2min，TBS 洗涤�?×2min）（具体修复方法见附 1�? 注：有些抗原勿需修复＋�/p>

直接进入� 5 步封闭�?nbsp;

5.封闭� 滴加试剂 B�?7℃湿盒孵� 30 min�?nbsp;

6.加一抗：滴加用试� C（即用型一抗）�?7℃湿盒孵� 2 hr � 4℃过夜；

7.洗涤� TBS-T 洗涤�?×5 min）；

8.封闭� 滴加试剂 B�?7℃湿盒孵� 10 min�?nbsp;

9.加二抗： 滴加用抗体稀释液稀释的生物素化二抗（试� D），37℃湿盒中孵育

30 min�?nbsp;

10.洗涤� TBS-T 洗涤�?×5 min）；

11.封闭� 滴加试剂 Tween 20�?7℃湿盒孵育封� 20 min�?nbsp;

12.� HRP-SA� 滴加用试� C 稀释的试剂 E�?�?0~200，终浓度 5~20 nM），37

℃湿盒中孵育 30 min�?nbsp;

13.洗涤� TBS-T 洗涤�?×5 min），TBS 洗涤�?×5 min）；

14.显色：应� DAB 溶液（试� F）显色；

15.复染：自来水充分冲洗，复染，脱水，透明�?nbsp;

16.封片� 待组织标本干后，用试剂缓冲甘油封固剂封片