摘要９/strong>本文建立了一种使用岛津高效液相色谱仪LC-20A和三重四极杆质谱仪LCMS-8030联用定性鉴别阿胶药材的方法。本文参照《中国药?2015?》中阿胶项下，使用胰蛋白酶酶解阿胶样品，选择阿胶的特征肽作为定性依据；按照药典要求建立了m/z539.8>612.4和m/z539.8>923.8检测离子对，且对照品溶液及市售药材样品中阿胶特征肽的信噪比均远远大?:1。该方法完全满足药典的要求，实现阿胶药材的快速、准确、炅敏的定性分析、/span>
关键词：高效液相色谱 三重四极杆质 阿胶特征肽段
胶类药材是具有典型民族特色的传统中药，为动物的皮熬制而成的明胶类物质。阿胶系驴皮经煎煮浓缩成的固体胶，能补血滋阴、润燥止血，用于贫血心悸、燥咳咯血、先兆流产、产后血虚、肌痿无力，是中医临床常用补益药。阿胶经水解后其胶原蛋白变为分子量更 的肽类，从而失去原有胶原蛋白的性质，无法进行来源鉴别?015版药典对阿胶的定性方法进行了修订，由2010版的茚三酮显色法修改为采用液质联用的方法检测特征肽段，方法更科学可靠、/span>
本文利用岛津三重四极杆液质联用系统LCMS-8030对阿胶中的特征肽段进行了分析，建立了阿胶定性鉴别分析方法，可为该类样品的分析提供参考、/span>
■实验部刅/strong>
1.1 仪器
岛津高效液相色谱仪LC-20A与三重四极杆质谱仪LCMS-8030联用系统。具体配置为LC-20AD×2输液泵，DGU-20A3在线脱气机，SIL-20AC自动进样器，CTO-20A柱温箱，CBM-20A系统控制器，LCMS-8030三重四极杆质谱仪，LabSolutions Ver.5.60SP2色谱工作站、/span>
1.2 分析条件
液相条件
色谱柱：Inertsil ODS-4 (2.1 mm I.D.×250 mm L., 5μm)
流动相：A?0.1%甲酸水溶涱br/> B?乙腈
流速：0.3 mL/min
柱温?0ℂbr/> 进样量：5μL
洗脱方式：梯度洗脱，B相初始浓度为5%，洗脱程序见??nbsp;
? 梯度洗脱程序
| Time(min) | Module | Action | Value |
| 0.00 | Pumps | Pump B Cone. | 5 |
| 20.00 | Pumps | Pump B Cone. | 20 |
| 40.00 | Pumps | Pump B Cone. | 50 |
| 40.10 | Pumps | Pump B Cone. | 100 |
| 45.00 | Pumps | Pump B Cone. | 100 |
| 45.10 | Pumps | Pump B Cone. | 5 |
| 55.00 | Controller | Stop |
质谱条件
离子化模式：ESI，正离子模式
离子喷雾电压?4.5kV
雾化气流速：氮气3.OL/min
干燥气流速：氮气15L/min
碰撞气：氩气
DL 温度?50ℂbr/> 加热模块温度?00ℂbr/> 扫描模式：多反应监测(MRM)
驻留时间?00 ms
延迟时间? ms
? MRM优化参数
| 化合物名?/span> | 前体离子 | 产物离子 | Q1 Pre Bais(V) | CE(V) | Q3 Pre Bais(V) |
| 驴皮特征肽段 | 539.8 | 612.4 | -38 | -22 | -22 |
| 923.8 | -38 | -24 | -40 |
1.3 对照品和样品配制及前处理方法
取对照药材或待测样品粉末0.1g，加1% NH4HC03溶液50mL，超声处?0min，使用微孔滤膜滤过。参照《中国药?2015版）》阿胶项下，取滤?00μL，置于进样瓶中，加胰蛋白酶溶液（取序列分析纯胰蛋白酶适量，加1% NH4HC03溶液溶解，制成每lμL中含lmg胰蛋白酶的溶?l0μL，摇匀?7℃恒温酶?2h，作为对照药材溶液或供试液，进LCMS-8030分析、/span>
■结果与讨论
2.1 阿胶对照药材的MRM色谱国/strong>
? 阿胶对照药材特征多肽的MRM色谱国/span>
LCMSMS分析获得阿胶对照药材特征多肽的MRM色谱图，保留时间为：13.76 min，图1中两对特征离子对539.8>612.4以及539.8>923.8的信噪比分别?161?05，充分满足药典中要求的色谱峰信噪比大?:1的要求、/span>
2.2 实际样品分析
对市售的一种阿胶药材样品进行分析，结果如图2和表3所示、/span>
? 市售阿胶样品的MRM色谱国/span>
? 实际样品中驴皮源特征肽段分析结果
| 样品编号 | 离子对信?/span> | 保留时间(min) | 峰高 | 峰面?/span> | 信噪毓/span> |
| 样品 | 539.8>612.4 | 13.76 | 1266 | 18994 | 464 |
| 539.8>923.8 | 856 | 12360 | 499 |
■结讹/strong>
本文建立了一种使用岛津三重四极杆液质联用仪LCMS-8030鉴定阿胶中特征肽段，实现了阿胶定性鉴别的方法。该方法所检测阿胶特征肽段MRM色谱图中离子?39.8>612.4, 539.8>923.8的响应明显，完全满足2015版药典要求色谱峰信噪比大?:1的要求，市售阿胶药材样品分析结果表明所测样品中含有阿胶成分。因此，本方法可为应对药典要求实现阿胶药材的快速、准确、灵敏的定性鉴别提供参考、/span>
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