斐林试剂(Fehling's Reagent)又称菲林试剂或裴林试剂，是德国化学家Hermann von Fehling 1849年所发明。斐林试剂与班氏试剂(Benedict's Reagent)相似，均是用来检测还原糖的存在。其原理是与可溶性的还原性糖(葡萄糖、果糖和麦芽�?在加热的条件下，能够生成砖红色的氧化亚铜沉淀、�/span>

还原糖检测试剂盒(斐林比色�?，主要由酒石酸钠钾、硫酸铜等组成。其测定原理是还原糖具有醛基和酮基，在碱性溶液中煮沸，能把斐林试剂中的Cu还原成Cu，使蓝色的斐林试剂脱色，脱色程度与溶液中还原糖含量成正比，在590nm下可用比色法测定吸光度，查标准曲线即可计算出样品中还原糖的含量。本产品主要用于含淀粉食品、酒精饮料、碳酸饮料、肉制品、蜜饯等食品和植物等样品中还原糖的定量检测；总糖的含量也可以测定，但需要提前水解后才能检测，也可用于还原糖的定性试验。本产品仅用于科研、�/span>

产品组成９�/strong>

产品名称	50T	100T	保存条件
试剂(A): Glu标准(1mg/ml)	30ml	50ml	2-8ℂ�/span>
试剂(B): Fehling’s Reagent A	50ml	100ml	室温
试剂(C): Fehling’s Reagent B	50ml	100ml	室温，避先�/span>
试剂(D):甲基红指示剂	10ml	20ml	室温
试剂(E): pH中和�?10×)	50ml	100ml	室温

自备材料９�/strong>

1.试管或离心管

2.锥形瓶、容量瓶、玻璃珠

3.水浴锅或酒精�?/span>

4.果糖、转化糖等还原糖标准(1mg/ml)

5.盐酸水溶液、氢氧化钠溶涱�/span>

6.10%乙酸铅溶液、饱和硫酸钠溶液

7.蒸馏水、碘涱�/span>

8.分光光度计、比色皿

操作步骤９�/strong>

1.配置斐林试剂：Fehling's Reagent A液和B液等比例混合即成，不可久置、�/span>

2.配置pH中和�?1×)：pH中和�?10×)和水�?:9比例混合即成、�/span>

3.样品中还原糖的提取：

a、固体样�?如含淀粉食品、植物样品等)：称取粉碎或混匀后的试样10�?0g(精确�?.01g)，置250ml容量瓶中，当体积接近150ml时，滴加1�?滴甲基红指示剂，如呈红色，可用pH中和液调至微黄色。若用风干样品，可称�?g，直接加入容量瓶，加入少量水湿润后，再加水至150ml左右加入指示剂和中和液。将容量瓶置�?0℃的恒温水浴中保�?0min，期间摇动数次，以便将还原糖充分提取出来。对于含蛋白质较多的样品＋�/span>

此时可加入乙酸铅溶液除去蛋白质，至不再产生白色絮状沉淀时，加入饱和的硫酸钠溶液除去多余的铅离子�?0min后取出冷却并定容至刻度，摇匀后取滤液备用、�/span>

b、酒精饮料：称取混匀后的试样100g(精确�?.1g)，置于蒸发皿上，滴加1�?滴甲基红指示剂，用pH中和液调至微黄色，在水浴上蒸发至原体积的1/4后，移入250ml容量瓶中，置�?0℃的恒温水浴中保�?0min，期间摇动数次。含蛋白质较多的样品参考上述方法。滤液备用、�/span>

c、碳酸饮料：称取混匀后的试样100g(精确�?.1g)，置于蒸发皿上，在水浴上微微搅拌除去二氧化碳后，移入250容量瓶中，用水洗涤蒸发皿，并入容量瓶，加水至刻度，混匀后备用、�/span>

d、总糖的水解和提取：称取植物样�?.5�?g，剪碎，加入蒸馏水约3ml匀浆，转移至三角烧瓶中，用12ml蒸馏水冲洗研磨器2�?次，冲洗液也转移至烧瓶中。向三角烧瓶中加�?0ml 6M盐酸溶液，摇匀，煮�?0min，并不时搅拌。取2滴加于小离心管中，再滴加1滴碘液，检查水解是否完全，如已经水解完全，则不显示蓝色。水解完毕后，冷却至室温，滴�?M氢氧化钠溶液，使溶液pH接近中性。含蛋白质较多的样品参考上述方法。滤液或上清液用蒸馏水定容至100ml，混匀。取10ml，用蒸馏水定容至100ml，摇匀备用、�/span>

4.制作还原糖标准曲线：按下表设置空白管(0�?、梯度标准管(1�?�?，按顺序依次加入、�/span>

加入物质(ml)	0	1	2	3	4	5	6
Glu标准(1mg/ ml)	0	0.5	1	1.5	2	2.5	3
蒸馏氳�/span>	3	2.5	2	1.5	1	0.5	0
葡萄糖含�?mg)	0	0.5	1	1.5	2	2.5	3
斐林试剂	2

将各管混匀后，沸水浴加�?5min。冷水或自来水冷却，2500r/min离心5�?0min、�/span>

取上清，1cm比色皿，空白管调零，用分光光度计�?90nm的吸光度值。以各标准管吸光度减去空白管吸光度的差值为纵坐标、对应葡萄糖含量为横坐标，绘制标准曲线、�/span>

5.样品还原糖的测定９�/span>

吸取准备好的还原糖提取液3ml，加�?ml斐林试剂，混匀。沸水浴加热15min。冷却、离心、取上清、测定等操作同标准曲线。空白管调零后，用样品管的吸光度值带入回归方程即可计算出样品中还原糖的含量、�/span>

结果计算９�/strong>

样品还原糖含�?%)= m×VT ×N/(m0 ×VS ×1000)×100

式中：m=样品中还原糖的含�?mg) VT=提取液总体�?ml)

N=稀释倍数

m0 =样品质量(g) VS=测定时取用的提取液体�?ml)

1000=单位换算系数、�/span>

附：还原糖的定性试骋�/strong>

1.配制斐林试剂工作液：临用前，取适量试剂(A)、试�?B)等量混合即成，即配即用、�/span>

2.向洁净试管中加�?�?ml待测样品、�/span>

3.向该试管中加�?ml斐林试剂工作液，充分摇匀、�/span>

4.将上述混合液置于沸水浴中，并持续1�?min、�/span>

5.观察试管内混合液颜色是否发生变化，其颜色变化顺序应为浅蓝�?棕色-砖红�?沉淀)、�/span>

鉴定结果９�/strong>

还原性糖(如核糖、葡萄糖、果糖等)砖红色沉淀非还原性糖(蔗糖、淀粉等)无颜色变匕�/span>

注意事项９�/span>

1.样品提取液中还原糖浓度过高时，应适当稀释后再行测定、�/span>

2.样品提取液中还原糖浓度过低时，可提高样品的浓度或增加提取液的用量、�/span>

3.可合理减少或增加提取液和斐林试剂的用量、�/span>

4.斐林试剂的A、B液须分开储存，临用前按要求混合使用、�/span>

5.斐林试剂B液呈强碱性，需小心操作、�/span>

6.6M盐酸配制：用市售盐酸和蒸馏水或去离子水等比例混合即成6M盐酸，该过程会放热，应小心操作，避免伤人、�/span>

有效期：12个月有效、�/span>