正式测定前务必取 2-3个预期差异较大的样本做预测定

测定意义

蔗糖是源(叶片�?光合产物向“库”器官运输的主要形态。蔗糖合成酶(Sucrose Synthase, EC 2.4.1.13)是双向反应酶，既可催化蔗糖合成又可催化蔗糖分解，是蔗糖代谢的关键酶之一。研究其合成方向 SS-Ⅱ的活性对于植物蔗糖合成具有重要意义、�/span>

测定原理

SS-Ⅱ催化游离果糖与葡萄糖供� UDPG反应生成蔗糖，蔗糖与间苯二酚反应可呈现颜色变化，� 480nm下有特征吸收峰，酶活力大小与颜色的深浅成正比、�/span>

需自备的仪器和用品

可见分光光度计、水浴锅、台式离心机、移液器�? ml玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水

试剂组成和配刵�/strong>

提取液：液体 60ml×1瓶，4℃保存；

试剂一：液� 4ml×1瓶，-20℃保存；

试剂二：1000μg/ml蔗糖溶液 10ml×1瓶，4℃保存；

试剂三：液体 3ml×1瓶，4℃保字�/span>

试剂四：液体 40ml×1瓶，4℃保存；

试剂五：液体 10ml×1瓶，4℃保存；

样品测定的准备：

按照组织质量(g)：提取液体积(ml)� 1�?�?0的比�?建议称取� 0.1g组织，加� 1ml提取�?，进行冰浴匀浆�?000g 4℃离� 10min，取上清，置冰上待测、�/span>

测定步骤

试剂名称(μL)	测定箠�/span>	对照箠�/span>	标准箠�/span>	空白箠�/span>
样本	30	30
蒸馏氳�/span>		150	150	180
试剂事�/span>			30
试剂一	150

混匀�?5℃准确水� 10min

试剂丈�/span>

50

50

50

50

沸水浴中煮沸 10min左右(盖紧，以防止水分散失)，冷即�/span>

试剂囚�/span>	700	700	700	700
试剂亓�/span>	200	200	200	200

混匀，沸水浴 30min，冷却后� 480nm下测定各管吸光值。标准管和空白管只要做一管、�/span>每个测定管需要设一个对照管、�/span>

SS-Ⅱ活性计箖�/span>

1、按照蛋白浓度计箖�/span>

单位定义：每 mg组织蛋白每分钟催化产� 1μg蔗糖定义为一个酶活力单位、�/span>

SS-Ⅱ活�?μg/min/mg prot)= C标准管×V₁×(A测定�?A对照�?÷(A标准�?A空白�?÷(V₁×Cpr)÷T=100×(A测定�?A对照�?÷(A标准�?A空白�?÷Cpr

2、按照样本鲜重计箖�/span>

单位定义：每 g组织每分钟催化产� 1μg蔗糖定义为一个酶活力单位、�/span>

SS-Ⅱ活�?μg/min/g鲜重) = C标准管×V₁×(A测定�?A对照�?÷(A标准�?A空白�?÷(W×V₁÷V₂)÷T=100×(A测定�?A对照�?÷(A标准�?A空白�?÷W

C标准管：标准管浓度，1000μg/ml；V₁：加入反应体系中样本体积�?.03ml� V₂：加入提取液体积�?ml；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/ml；W：样本鲜重，g；T ：反应时间：10min、�/span>