正式测定前取 2-3个预期差异较大的样本做预测定

测定意义９�/span>

纤维素是由葡萄糖组成的大分子多糖，通常与半纤维素、果胶和木质素结合在一起，是植物细胞壁的主要结构成分。纤维素是一种重要的膳食纤维，是自然界中分布最广、含量最多的一种多糖、�/span>

测定原理９�/span>

纤维素为β－葡萄糖残基组成的多糖，在酸性条件下加热能分解成β－葡萄糖。β－葡萄糖在强酸作用下，可脱水生成β－糠醛类化合物。β－糠醛类化合物与蒽酮脱水缩合，生成糠醛衍生物。颜色的深浅可间接定量测定纤维素含量、�/span>

需自备的仪器和用品９�/span>

酶标仪、水浴锅、可调式移液器�?6孔酶标板�?0%乙醇、丙酮、浓硫酸(不允许快�?、研钵和蒸馏水、�/span>

试剂的组成和配制９�/span>

试剂一：液� 100mL× 1瓶，4℃保存、�/span>

试剂二：粉剂×1瓶，4℃避光保存、�/span>

试剂三：液体 6mL× 1支，4℃保存、�/span>

样品的前处理９�/span>

1、样� 80℃烘干至恒重^{【注 1【�/sup>，粉碎，� 40目筛。称� 0.01g样本，加� 1mL 80%乙醇�?0℃水� 20min【注 2【�/sup>，冷却至室温�?000g 25℃离� 10min，弃上清。沉淀中加� 1.5mL80%乙醇和丙酮各清洗一�?涡旋振荡 2min左右�?000g 25℃离� 10min，弃上清)，沉淀烘干后即为粗细胞壁、�/span>}

2、在上述粗细胞壁中加� 1mL试剂一，充分混匀�?0℃水� 30min^{【注 2【�/sup>。取出冷却后 8000g25℃离� 10min，弃上清。沉淀中加� 1mL蒸馏水混匀，涡旋振� 2min左右�?000g 25℃离� 10min，弃上清，沉淀用蒸馏水重复清洗 3�?加入 1mL蒸馏水混匀，涡旋振� 2min左右�?000g 25℃离� 10min，弃上清)。沉淀中加� 1mL丙酮，混匀� 8000g 25℃离� 10min，弃上清，沉淀烘干待用、�/span>}

3.在上述烘干的沉淀中加� 0.5mL蒸馏水，置于冰水浴中，缓慢加� 0.75mL浓硫酸，混匀，冰水浴中静� 30min�?000g 4℃离� 10min，取上清液，用蒸馏水稀� 20倍后待测^{【注 3【�/sup>、�/span>}

注意事项９�/span>

【注 1� 80℃烘干的时间� 2小时，依据样本情况可延长烘干时间、�/span>

【注 2� 90℃加热过程中 EP管可能爆开，建议用胶带封口或使用带螺旋盖的防爆 EP管、�/span>

【注 3】部分样本中纤维素含量较�?淀粉含量较�?，如米粉、板栗、甘薯等，可不稀释或减小稀释倍数、�/span>

测定步骤９�/span>

1、酶标仪预热 30min以上，调节波长至 620nm、�/span>

2、调节水浴锅� 95度、�/span>

3、工作液的配制：在试剂二中加� 4mL试剂三，充分溶解，如较难溶解，可加热搅拌；用不完的试� 4℃保存一周；

4、加样表(� EP管中反应)９�/span>

试剂(μL)	空白箠�/span>	测定箠�/span>
样本		150
蒸馏氳�/span>	150
工作涱�/span>	35	35
浓硫酷�/span>	315	315

混匀，置 95度水浴中 10min(盖紧，以防止水分散失)，冷却至室温后，� 200μL� 96孔酶标板中，� 620nm处，分别读取空白管和测定管吸光值，ΔA=A测定�?A空白管、�/span>

注意９�/span>

1、空白管只要做一管、�/span>

2、由于浓硫酸具有强腐蚀性，请谨慎操作、�/span>

纤维素含量计算：

1、标准条件下测定的回归方程为 y = 5.25x - 0.0043；x为标准品浓度(mg/mL)，y为吸光值、�/span>

2、按样本质量计算９�/span>

纤维�?mg/g干重)= [(ΔA�?.0043)÷5.25×V₁]÷(W×V₁÷V₂)×20=4.76×(ΔA�?.0043)÷W

V₁：加入样本体积，0.15mL；V₂：加入提取液体积�?.25mL；W：样本干重；W：样本干重， 0.01g�?0：样本稀释倍数、�/span>

注意：最低检测限�1mg/g干重�10μg/ mg prot