注意：正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定、�/span>

测定意义９�/span>

样品可溶性蛋白质含量常常用于酶活性计算。此外，可溶性蛋白质含量也用于食品等质量分析、�/span>

测定原理９�/span>

在酸性溶液中，考马斯亮� G-250 与蛋白质结合形成蓝色复合物；该复合物� 620nm 处有最大吸收峰� 其颜色的深浅与蛋白质的浓度成正比。该方法灵敏度高，适合微量蛋白质分析、�/span>

自备仪器和用品：

离心机、分光光度计、石英比色皿、移液器和蒸馏水、�/span>

试剂组成和配制：

试剂一：液� 30 mL×1 瓶，4℃保存、�/span>

样品中可溶性蛋白质提取９�/span>

1.液体样品：澄清液体样品可以直接测定、�/span>

2.组织样品：按照组织质�?g)：提取液体积(mL)� 1�?0 的比�?建议称取� 0.05 g 组织，加� 1mL 提取�?自备，根据需要选用酶提取缓冲液或者蒸馏水或者生理盐�?) 冰浴匀浆，8000g�?℃离� 10min，取上清，即待测液�?动物样品常常需要稀�?

3.细菌、真菌：按照细胞数量(104 �?：提取液体积(mL)� 500�?000�? 的比�?建议 500 万细胞加� 1mL 提取�?，冰浴超声波破碎细胞(功率 300w，超� 3 秒，间隔 7 秒，总时� 3min)；然� 8000g�?℃，离心 10min，取上清置于冰上待测、�/span>

测定操作９�/span>

1. 分光光度计预� 30 min，蒸馏水调零、�/span>

2. 在石英比色皿中加入：

试剂(μL)	测定箠�/span>	空白箠�/span>
样本	500
蒸馏氳�/span>		500
试剂一	500	500
混匀后，测定波长 620 nm 吸光值，△A=A测定-A 空白、�/span>

注意９�/span>

1� 空白管只需要测定一次�?� 测定管的待测样品蛋白质浓度要控制� 1-100μg/mL 范围内，尽量控制在中间范围�?� 测定管若出现浑浊或分层现象，就说明蛋白含量较高，通常须将待测液用提取液稀�?0�?0 倍后重新检测、�/span>

计算公式９�/span>

标准曲线：y = 14.253x - 0.0007；R2 = 0.9997：�br/>x: 蛋白标准品浓�?mg/mL；线性范围为 0.001�?.1mg/mL)� y: 吸光值差倻�/span>

1.按液体样本体积计算：Cpr(mg/mL)=(△A+0.0007)÷14.253=0.07×(△A+0.0007)

2.按组织样本质量计算：Cpr(mg/g 鲜重)=(△A+0.0007)÷14.253×V 总÷W=0.07×(△A+0.0007)÷W

V 总：提取液体积，1 mL� W：样本质量，g、�/span>