正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定

测定意义９�/span>

Cx(EC3.2.1.4)存在于细菌、真菌和动物体内，是纤维素酶系的组份之一，Cx主要作用于非晶态纤维素和水溶性纤维素衍生物，随机水解糖苷键，将其分解成葡萄糖、纤维二糖、纤维三糖和其他寡聚体、�/span>

测定原理９�/span>

采用3,5－二硝基水杨酸法测定Cx催化羧甲基纤维素钠降解产生的还原糖的含量、�/span>

需自备的仪器和用品９�/span>

可见分光光度计、水浴锅、离心机、可调式移液器�?mL 玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水、�/span>

试剂的组成和配制９�/span>

提取液：液体 50mL×1 瓶，4℃保存；

试剂一：液� 15mL×1 瓶，4℃保存；

试剂二：液体 60mL×1 瓶，4℃保存；

样品测定的准备：

1、细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数�?10⁴�?：提取液体积(mL)� 500�?000�? 的比�?建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取�?，超声波破碎细菌或细�?冰浴，功� 20%� 200W，超� 3s，间� 10s，重� 30 �?�?000g 4℃离� 10min，取上清，置冰上待测、�/span>

2、组织：按照组织质量(g)：提取液体积(mL)� 1�?�?0 的比�?建议称取� 0.1g 组织� 加入 1mL 提取�?，进行冰浴匀浆�?000g 4℃离� 10min，取上清，置冰上待测、�/span>

3、血�?�?样品：直接检测、�/span>

测定步骤９�/span>

1� 分光光度计预� 30min 以上，调节波长至 540nm，蒸馏水调零、�/span>

2、加样表(� EP 管中依次加入下列试剂)９�/span>

试剂名称(μL)	测定箠�/span>	对照箠�/span>
样本	50	50
试剂一	500
蒸馏氳�/span>		500

混匀�?7℃准确水� 2h

试剂事�br/>

1000

1000

混匀� 90℃水� 10min(盖紧，防止水分散�?，冷却后，测 540nm 下吸光� A，计� ΔA=A 测定�?A 对照管。每个测定管需设一个对照管、�/span>

Cx 活性计箖�/span>

1、标准条件下测定回归方程� y = 6.4078x - 0.0673；x 为标准品浓度(mg/mL)，y 为吸光值、�/span>

2、血�?�?Cx 活力的计箖�/span>

单位的定义：� mL 血�?�?每分钟催化产� 1μg 葡萄糖定义为一个酶活力单位、�/span>

Cx 活力(μg /min/mL)= [1000×(ΔA+0.0673) ÷6.4078×V 反总]÷V 样÷T=14.305×(ΔA+0.0673)

3、细胞、细菌和组织� Cx 活力的计箖�/span>

(1)按照蛋白浓度计算

单位的定义：� mg 组织蛋白每分钟催化产� 1μg 葡萄糖定义为一个酶活力单位、�/span>

Cx 活力(μg /min/mg prot)=[ [1000×(ΔA+0.0673) ÷6.4078×V 反总]÷(V 样×Cpr) ÷T=14.305×(ΔA+0.0673) ÷Cpr

(2)按样本鲜重计箖�/span>

单位的定义：� g 组织每分钟催化产� 1μg 葡萄糖定义为一个酶活力单位、�/span>

Cx 活力(μg /min /g 鲜重)=[1000×(ΔA+0.0673) ÷6.4078×V 反总]÷(W×V 样÷V 样�?÷T=14.305×(ΔA+0.0673) ÷W

(3)按细菌或细胞密度计算

单位的定义：� 1 万个细菌或细胞每分钟催化产生 1μg 葡萄糖定义为一个酶活力单位、�/span>

Cx 活力(μg/min /10⁴cell)=[1000×(ΔA+0.0673) ÷6.4078×V 反总]÷(500×V样÷V样�?÷T=0.0286×(ΔA+0.0673)

1000�?mg/mL=1000ug/mL；V 反总：反应体系总体积，0.55mL；V 样：加入样本体积�?.05 mL；V 样总：加入提取液体积，1 mL；T：反应时间，120 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g�?00：细菌或细胞总数�?00 万、�/span>