检测原琅�
线粒体呼吸链复合物III，通常称为辅酶Q－细胞色素C还原酶、细胞色素还原酶或bc1复合物（ubiquinol cytochrome c oxidoreductase；cytochrome reductase；bc1 complex），是线粒体电子传递链的中心元素：含有十一个亚单位，包括细胞色素b（Cytochrome b），细胞色素c1（cytochrome c1）和Rieske铁硫蛋白（Rieske iron-sulfurprotein），通过Q循环（Q cycle）进行催化作用。其特征性的酶活性是抗霉素敏感的辅酶Q－细胞色素C还原酶。复合物III催化氧化型细胞色素C被还原为还原型细胞色素C，线粒体内电子由供体还原型泛醌（ubiquinol；UQH2）或还原型辅酶Q（reduced Coenzyme Q；CoQH2）传递到细胞色素C上的能量转移反应，进行呼吸链传递。该酶异常会导致心肌疾病。辅酶Q－细胞色素C还原酶反应系统测定氧化型细胞色素C的浓度变化。基于还原型泛醌或还原型辅酶Q底物，在抗霉素存在与否的情况下，通过辅酶Q-细胞色素C还原酶的催化，转化成泛醌（ubiquinone；UQ）或辅酶Q（Coenzyme Q；CoQ），同时氧化型细胞色素C，转化为还原型细胞色素C，在分光光度仪下产生吸光峰值的变化�?50nm 波长），由此定量测定辅酶Q－细胞色素C还原酶的特异活性。其反应系统是：
Complex III
CoQH2 + 2 ferricyt c3+ + 2H+-----------------> CoQ + 2 ferrocyt c2+ + 4H+
↓Abs 550 nm ↑Abs 550 nm

试剂组成：（20 �?10 �?（�br/> 缓冲液（Reagent A� 20 毫升
反应液（Reagent B� 125 微升
阴性液（Reagent C�?nbsp; 2 毫升
底物液（Reagent D� 500 微升
专性液（Reagent E�?nbsp; 200 微升
稳定� A（Reagent F1� 4 箠�br/> 稳定� B（Reagent F2� 5 毫升
产品说明� 1 仼�br/>
保存方式
-20°C冰箱保存，避免反复冻融；反应液（Reagent B）和底物液（Reagent D），避免光照，有效期3个月、�br/>
用户自备
比色皿：用于比色分析的容�?br/> 双波长分光光度仪：用于比色分枏�br/> 培养箱：用于孵育反应�?br/>
实验步骤
实验开始前，将�?0°C冰箱里的试剂盒中的试剂溶液置入冰槽里融化；反应液（Reagent B）和底物液（Reagent D）注意避光、�br/> （一）、背景对照测宙�br/>1、移� 870 微升缓冲液（Reagent A）到新的比色皾�br/>2、加� 10 微升反应工作涱�br/>3、加� 20 微升底物液（Reagent D（�br/>4、室温下静置 10 分钟，避免光�?br/>5、加� 100 微升阴性液（Reagent C（�br/>6、上下倾倒数次，混匀（限定在 3 秒之内）
7、即刻放入分光光度仪检测，此为背景空对照：
550 波长读数 1 分钟� 2 分钟�?50 波长读数 0 分钟
（二）、样品总活性测宙�br/>1、移� 870 微升 GENMED 缓冲液（Reagent A）到新的比色皾�br/>2、加� 10 微升 GENMED 反应工作涱�br/>3、加� 20 微升 GENMED 底物液（Reagent D（�br/>4、室温下静置 10 分钟，避免光�?br/>5、加� 100 微升待测样品（注意：15 微克总线粒体蛋白（�br/>6、上下倾倒数次，混匀（限定在 3 秒之内）
7、即刻放入分光光度仪检测，此为样品总活性读数：
550 波长读数 1 分钟� 2 分钟�?50 波长读数 0 分钟
（三）、样品非特异活性测宙�br/>1、移� 850 微升 GENMED 缓冲液（Reagent A）到新的比色皾�br/>2、加� 10 微升 GENMED 反应工作液，避免光照
3、加� 20 微升 GENMED 底物液（Reagent D（�br/>4、室温下静置 10 分钟，避免光�?br/>5、加� 20 微升 GENMED 专性液（Reagent E（�br/>6、加� 100 微升待测样品（注意：15 微克总线粒体蛋白（�br/>7、上下倾倒数次，混匀（限定在 3 秒之内）
8、即刻放入分光光度仪检测，此为样品非特异活性读数：
550 波长读数 1 分钟� 2 分钟�?50 波长读数 0 分钟

样品活性计算：
�?）、样品活性（总活性或非特异活性）

单位：μmol CoQH2/min/mgprot

�?）、样品特异活�?br/> 样品总活性－样品非特异活性＝样品特异活�?/p>