犬巨球菌PCR检测试剂盒检测方法：

1.Ⅰ法９�/p>

在PCR反应体系中，加入过量SYBR荧光染料，SYBR荧光染料特异性地掺入DNA双链后，发射荧光信号，而不掺入链中的SYBR染料分子不会发射任何荧光信号，从而保证荧光信号的增加与PCR产物的增加完全同步、�/p>

定量PCR扩增荧光曲线国�/p>

PCR产物熔解曲线国�/p>

2.TaqMan探针法：

探针完整时，报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收；PCR扩增时，Taq酶的5�?3’外切酶活性将探针酶切降解，使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离，从而荧光监测系统可接收到荧光信号，即每扩增一条DNA链，就有一个荧光分子形成，实现了荧光信号的累积与PCR产物的形成完全同步、�/p>

取冻存已裂解的细胞，室温放置5分钟使其完全溶解、�/p>

②两相分� �?ml的TRIZOL试剂裂解的样品中加入0.2ml的lvfang，盖紧管盖。手动剧烈振荡管�?5秒后�?5�?0℃孵�?�?分钟�?℃下12000rpm离心15分钟。离心后混合液体将分为下层的红色酚lvfang相，中间层以及无色水相上层。RNA全部被分配于水相中。水相上层的体积大约是匀浆时加入的TRIZOL试剂�?0%、�/p>

③RNA沉淀 将水相上层转移到一干净无RNA酶的离心管中。加等体积yibing醇混合以沉淀其中的RNA，混匀�?5�?0℃孵�?0分钟后，�?℃下12000rpm 离心10分钟。此时离心前不可见的RNA沉淀将在管底部和侧壁上形成胶状沉淀块、�/p>

④RNA清洗 移去上清液，�?mlTRIZOL试剂裂解的样品中加入至少1ml�?5%yi�?75%yi醇用DEPCH2O配制)，清洗RNA沉淀。混匀后，4℃下7000rpm离心5分钟、�/p>

⑤RNA干燥 小心吸去大部分yi醇溶液，使RNA沉淀在室温空气中干燥5-10分钟、�/p>

⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA时，先加入无RNA酶的�?0μl用枪反复吹打几次，使其完全溶解，获得的RNA溶液保存�?80℃待用� 1)紫外吸收法测定先用稀释用的TE溶液将分光光度计调零。然后取少量RNA溶液用TE稀�?1:100)后，读取其在分光光度�?60nm�?80nm处的吸收值，测定RNA溶液 浓度和纯度、�/p>