小鼠二肽基肽酶Ⅳ（DPPⅣ）ELISA kit双抗体夹心法

1.包被：用0.05MPH9.牰碳酸盐包被缓冲液将抗体稀释至蛋白质含量为1�?0μg/ml。在每个聚苯乙烯板的反应孔中�?.1ml�?� 过夜。次日，弃去孔内溶液，用洗涤缓冲液洗3次，每次3分钟。（简称洗涤，下同）、�/p>

2.　加样：加一定稀释的待检样品0.1ml于上述已包被之反应孔中，�?7� 孵育1小时。然后洗涤。（同时做空白孔，阴性对照孔及阳性对照孔）、�/p>

3.　加酶标抗体：于各反应孔中，加入新鲜稀释的酶标抗体（经滴定后的稀释度�?.1ml�?7� 孵育0.5�?小时，洗涤、�/p>

4.　加底物液显色：于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml�?7� 10�?0分钟、�/p>

5.　终止反应：于各反应孔中加�?M硫酸0.05ml、�/p>

6.　结果判定：可于白色背景上，直接用肉眼观察结果：反应孔内颜色越深，阳性程度越强，阴性反应为无色或极浅，依据所呈颜色的深浅，以�?”、�?”号表示。也可测OD值：在ELISA检测仪上，�?50nm（若以ABTS显色，则410nm）处，以空白对照孔调零后测各孔OD值，若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍，即为阳性、�/p>