免疫荧光实验步骤实验流程９�/p>

�?� 细胞准备。对单层生长细胞，在传代培养时，将细胞接种到预先放置有处理过的盖玻片的培养皿中，待细胞接近长成单层后取出盖玻片，PBS洗两次；对悬浮生长细胞，取对数生长细胞，用PBS离心洗涤�?000rpm�?min�?次，用细胞离心甩片机制备细胞片或直接制备细胞涂片、�/p>

�?� 固定。根据需要选择适当的固定剂固定细胞。固定完毕后的细胞可置于含叠氮纳的PBS�?℃保�?个月。PBS洗涤3×5 min、�/p>

�?� 通透。使用交联剂（如多聚甲醛）固定后的细胞，一般需要在加入抗体孵育前，对细胞进行通透处理，以保证抗体能够到达抗原部位。选择通透剂应充分考虑抗原蛋白的性质。通透的时间一般在5-15min。通透后用PBS洗涤3×5 min、�/p>

�?� 封闭。使用封闭液对细胞进行封闭，时间一般为30min、�/p>

�?� 一抗结合。室温孵�?h或�?℃过夜。PBST漂洗3次，每次冲洗5min、�/p>

�?� 二抗结合。间接免疫荧光需要使用二抗。室温避光孵�?h。PBST漂洗3次，每次冲洗5min后，再用蒸馏水漂洗一次、�/p>

�?� 封片及检测。滴加封片剂一滴，封片，荧光显微镜检查、�/p>