实验报告９�/span>

一�?/span>HuT78(T淋巴细胞白血病细�?分离与培养：

1、无菌条件下，取�?-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清�?次，最后将组织剪成1mm3左右大小：�/span>

2、往组织块中加入4 mL酶消化液�?.1% 胰酶�?.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加�?�?mL酶消化液，混�?0s，置37℃消�?0 min后，按上述方法收集上清并终止消化�?℃放置，重复此步�?-3次，直至组织完全被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含�?0� FBS DMEM/F12培养基混悬，接种�?5cm2培养瓶，放置�?7� �?％CO2 培养箱中培养：�/span>

5、差速贴�?h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；

二、免疫荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min：�/span>

2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min：�/span>

3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，�?% BSA封闭细胞30min：�/span>

4、按1: 100的比例稀释�?actin一抗（Abbioscience公司），然后将其放在4℃箱中孵育细胞过夜；

5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1�?50的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h：�/span>

6、用PBS冲洗3次，每次10min，最后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照、�/span>

产品名称	产品简�?/span>	货号
HuT78(T淋巴细胞白血病细�?	HuT78	GOY-X6330

特性：

安全性：所有肿瘤和病转染的细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需高压灭菌后方能丢弃。收到细胞后，在倒置镜下好是�?/span>4X物镜)观察整个细胞生长情况

（一）如果细胞未长满，用75%酒精喷洒整个瓶消后放到超菌台内，严格无菌操作，打开细胞培养瓶，吸出培养液，� 10ml新鲜培养液后继续培养、�/span>

(�?如果细胞已长满，即可进行传代培养。具体步骤如下：

1. 弃去培养液，用PBS（不含钙,镁离子）�?-2次、�/span>

2. �?ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，倒放�?7℃培养箱1-3分钟预热，之后翻转培养瓶10-30秒后，在倒置显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量完全培养基终止消化、�/span>

3. �?-8ml/瓶补加完全培养基，轻轻打匀后吸出一半，分到新的培养瓶中、�/span>

细胞特性：

1)组织来源于实验动物的正常眼组织、�/span>

2)细胞鉴定：细胞角蛋白-18(CK-18)免疫荧光染色为阳性、�/span>

3)经鉴定细胞纯度高�?0%、�/span>

4)不含� HIV-1� HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌、�/span>

5)细胞生长方式：上皮样，不规则细胞，贴壁培养、�/span>

注意事项９�/span>

1、观察细胞zui好在低倍镜�?�?X物镜)下进行，否则不能准确判断细胞的传代密度。看细胞的形态请�?0X�?0X物镜下、�/span>

2、瓶中运输培养基不能重复再用,请换用加双抗的新培养基，细胞冻存�?培养基中可不加任何抗生素、�/span>

3、有些细胞贴壁不牢，如发现贴壁细胞有脱落，可离心吹打后接种到新瓶内、�/span>

4、收到细胞后，若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染，请及时与我们、�/span>

FOSL1 (Fos-related antigen 1) ELISA KITMouse Serpina3c(Serine protease inhibitor A3C) ELISA Kit正丁硫醚软组织固着液（Bouin固着液）

FFAR1 (Free fatty acid receptor 1) ELISA KITMouse FAM3D(Protein FAM3D) ELISA KitN-Boc-4-哌啶乙醇骨组织固着�

FRAS1 (Extracellular matrix protein FRAS1) ELISA KITMouse Mcpt4(Mast cell protease 4) ELISA KitN-Boc-4-哌啶乙醇活检组织固着�

FRAT1 (Proto-oncogene FRAT1) ELISA KITMouse ELOVL7(Elongation of very long chain fatty acids protein 7) ELISA KitN,N-二甲基丙烯基脲抗原保护固着液（10％中性Formalin 固着液）

TREM2(Triggering receptor expressed on myeloid cells 2) ELISA KitMouse DA(Dopamine) ELISA KitN,N-二甲基丙烯基脲免疫荧光样品固着液（Michel固着液）

FRAT2 (GSK-3-binding protein FRAT2) ELISA KITMouse Qprt(Nicotinate-nucleotide pyrophosphorylase [carboxylating]) ELISA KitN,N'-�?Boc-1H-1-胍基吡唑胃肠组织固着液（Hollande固着液）

FUOM (Fucose mutarotase) ELISA KITMouse MASP2 ELISA KitN,N'-�?Boc-1H-1-胍基吡唑前列腺固着液（Hollande固着液）

FNBP1 (Formin-binding protein 1) ELISA KITMouse MN(Metanephrine) ELISA KitN,N'-�?Boc-1H-1-胍基吡唑肾组织固着液（BUBOSCQ-BRAZIL固着液）

PPP3CC ELISA KitCENPH 着丝粒蛋白H抗体氯甲�?2,2,2-三氯乙酯尿素酵�/span>

PPP1R9A ELISA KitCKAP4 细胞骨架相关蛋白4抗体氯甲�?2,2,2-三氯乙酯葡萄糖半固体

PPP1CC ELISA KitCRISP3 富含半胱氨酸分泌蛋白3抗体氯甲�?2,2,2-三氯乙酯鸟氨酸脱羧酶肉汤

PPP3R2 ELISA KitCKMT/Creatine kinase MT 酸性型线粒体肌酸激酶抗�?-(三氟甲基)噻吩-2-羧酸葡萄糖铵

PPP2CA ELISA KitSCRO/DCUN1D1 鳞状细胞癌相关蛋白抗体胸腺嘧啶蛋白胨水（色氨酸肉汤）

PPP2R1B ELISA KitDDX53/CT26 肿瘤/睾丸抗原26抗体胸腺嘧啶赖氨酸脱羧酶肉汤

PPP2CB ELISA KitDEPDC1 细胞周期调控蛋白SDP35抗体胸腺嘧啶卫矛醇半固体

PPP1CC ELISA KitENTPD5/CD39L4 原癌基因CD39样蛋�?抗体三异丙基硅基三氟甲磺酸酯丙二酸盐

特性：

安全性：所有肿瘤和病转染的细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需高压灭菌后方能丢弃。收到细胞后，在倒置镜下好是�?/span>4X物镜)观察整个细胞生长情况

（一）如果细胞未长满，用75%酒精喷洒整个瓶消后放到超菌台内，严格无菌操作，打开细胞培养瓶，吸出培养液，� 10ml新鲜培养液后继续培养、�/span>

(�?如果细胞已长满，即可进行传代培养。具体步骤如下：

1. 弃去培养液，用PBS（不含钙,镁离子）�?-2次、�/span>

2. �?ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，倒放�?7℃培养箱1-3分钟预热，之后翻转培养瓶10-30秒后，在倒置显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量完全培养基终止消化、�/span>

3. �?-8ml/瓶补加完全培养基，轻轻打匀后吸出一半，分到新的培养瓶中、�/span>