产品组分
注: 本产品分含体系中包含溴酚蓝、不含溴酚蓝两类。体系中包含溴酚蓝的产品,PCR扩增产物可直接电泳检测。这两类产品的扩增性能无差异。如没特别说明提供体系中包含溴酚蓝的包装、br/>保存条件-20℃保?年、br/>请勿保存?70℃,防止反复冻融导致酶活降低、br/>产品说明PCR Mix?×浓缩的PCR扩增预混和溶液,含有Taq DNA聚合酶、dNTPs、缓冲液等PCR扩增必需组分(模板与引物除?。使用时,仅需在扩增体系中加入模板和引物即可进行PCR,大大简化操作过程,缩短操作时间,降低污?加样次数减少)同时,由于体系内含有增强剂,能够显著增强PCR扩增的灵敏度。扩增产物具?'-dA突出端、br/> Taq DNA聚合酶是嗜热性细菌Thermus aquaticus来源的热稳定重组型Taq DNA聚合酶,分子量为94 KD。扩增片段的长度可达5 kb(简单模?。延伸速度?.9-1.2 kb/ min(70-75 ?。该酶具?'?'聚合酶活性,?'?'外切酶活性、br/>产品特点使用方便:仅需加入模板和引物即可进行PCR扩增、br/> 快速、高效:减少加样步骤,节约时间、br/> 可重复:降低污染和加样错误风?br/>产品用逓br/>高通量PCR检测、br/> 高重复性PCR检测、br/> 制备TA克隆用的PCR产物、br/>活性定么br/>一个活性单?U)指用活性化的大马哈鱼精子DNA作为模板/引物,在72℃?0 min内,摄入10 nmol全核苷酸所需的酶量、br/>质量控制相关测试表明无外源内切酶或外切脱氧核糖核酸酶、核糖核酸酶污染;PCR方法检测无宿主残余DNA,能有效扩增人基因组中的单拷贝基因;室温放置一周,扩增活性无明显改变、br/>2×PCR Mix(前名Taq Mix)的组刅br/>100 mM KCl20 mM Tris-Cl3 mM MgCl20.4 mM dNTP混合?br/> 0.1 U/μlTaq DNA聚合酵br/> 溴酚蓝等应用举例注:以下反应举例?0 μl标准PCR体系,仅供参考。实际PCR条件应根据模板、引物结构、目的片段大小加以优化,确定较佳反应条件?Taq Mix即PCR Mix)以λDNA为模板,扩增1kb片段、br/>
反应条件
备注9br/>1 建议在冰上配置PCR 反应液后,再放入PCR仪中进行扩增。这有利于提高扩增的特异性,减少非特异性扩增,得到良好的PCR结果、br/> 2 模板DNA推荐用量(50 μl PCR反应体系)
Q&A问:PCR Mix的反应体系与普通Taq DNA聚合酶的反应体系有何不同>br/>答:PCR Mix的反应体系中除Taq DNA聚合酶、dNTP混合物、Mg2+等常规组分外,还包含适当比例的PCR Enhancer与稳定剂。而且,反应体系中的离子种类与浓度也有所区别、br/>问:为什么PCR Mix的灵敏度与扩增效率会高于普通Taq DNA聚合酶?答:这是由于东盛对PCR Mix反应缓冲液中的成分与浓度进行了优化。我们在TaqMix反应缓冲液中添加了适当比例的PCR Enhancer,提高了聚合酶的热稳定性,显著降低DNA二级结构对于PCR扩增的影响。同时,对PCR Mix反应缓冲液中的离子浓度与比例进行优化,使得聚合酶处于最适活性状态,从而获得了较佳的扩增效率、br/>问:为什么PCR Mix的重复性更好?答:这是由于PCR Mix是规模化工业生产,PCR体系组分的浓度与比例一致性好,且减少多种溶液被PCR模板污染的可能性,以及在加样过程中人为造成的误差,大大提高了实验的重复性,特别适合高通量与高重复性PCR检测、br/>问:PCR Mix的扩增产物能否直接进行TA克隆>br/>答:可以直接进行TA克隆、/span>