CCK-8试剂监/span>
Cell Counting Kit -8
货号 |
规格 |
CT-K-5 |
5毫升,500欠/span> |
CT-K-10 |
10毫升,1000欠/span> |
检测原琅/span>
CCK-8试剂盒是一种基亍/span>WST-8的广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的快速高灵敏度检测试剂盒、/span>
WST-8属于MTT的升级产品，能在电子载体1-甲氧培/span>PMS的作用下被还原成水溶性甲臜产物，生成的甲臜量与活细胞数量成正比，因此颜色的深浅与细胞的增殖成正比，与细胞毒性成反比。使用酶标仪?/span>450 nm波长处测宙/span>OD值，可以反映活细胞数量、/span>
CCK-8法与普通的MTT法相比，具有显著特点９/span>
☄/span>灵敏度高，数据可靠，重现性好
☄/span>操作简便，省时省力
☄/span>水溶性，不需要换液，尤其适合于悬浮细胝/span>
☄/span>无需放射性同位素和有机溶剂，对细胞毒性低
☄/span>丹/span>1瓶溶液，毋需预制，即开即用
☄/span>适合于高通量药物筛逈/span>
CCK-8用途：药物筛选、细胞增殖测定、细胞毒性测定、肿瘤药敏试骋/span>
CCK-8方法的优劾/span>
CCK-8法与其他细胞增殖/毒性检测方法的优势比较
检测方泔/span> |
MTT泔/span> |
XTT泔/span> |
WST-1泔/span> |
CCK-8泔/span> |
甲臜产物的水溶?/span> |
差（需加有机溶剂溶解后再检测） |
奼/span> |
奼/span> |
奼/span> |
产品性状 |
粉末 |
2瓶溶涱/span> |
溶液 |
1瓶溶涱/span> |
使用方法 |
配成溶液后使?/span> |
现配现用 |
即开即用 |
即开即用 |
检测灵敏度 |
髗/span> |
很高 |
很高 |
髗/span> |
检测时闳/span> |
较长 |
较短 |
较短 |
最?/span> |
检测波镾/span> |
560-600 nm |
420-480 nm |
420-480 nm |
430-490 nm |
细胞毒?/span> |
高，细胞形态完全消夰/span> |
很低，细胞形态不受/span> |
很低，细胞形态不受/span> |
很低，细胞形态不受/span> |
试剂稳定?/span> |
一?/span> |
较差 |
一?/span> |
很好 |
批量样品检浊/span> |
可以 |
非常适合 |
非常适合 |
非常适合 |
便捷程度 |
一?/span> |
便捷 |
便捷 |
非常便捷 |
保存条件９/span>
4oC避光保存一年有效，-20oC避光保存两年有效、/span>避免反复冻融、/span>
CCK-8试剂盒操作说昍/span>
CCK-8溶液可直接加到细胞中，不需要与其它组分预混。由亍/span>CCK-8溶液非常稳定并且细胞毒性很小，所以可以进行长时间孵育，例如孵肱/span>24-48小时、/span>
在进行以下实验之前，可先设置空白对照孔，仅加入相应量细胞培养液、药物和CCK-8溶液，不加入细胞、/span>
方法一.制作标准曲线（测定细胞具体数量）
1、先用细胞计数板计数所制备的细胞悬液中的细胞数量，然后接种细胞到培养板内、/span>
2、按比例（例如：1/2比例）依次用培养基等比稀释成一个细胞浓度梯度，一般要偙/span>3-5个细胞浓度梯度，每个浓度建议3-6个复孔、/span>
3、接种后培养2-4小时使细胞贴壁，然后按培养基体积皃/span>10%加入CCK-8试剂，培养一定时间后测定OD值，制作出一条以细胞数量为横坐标＇/span>X轴）＋/span>OD值为纵坐标（Y轴）的标准曲线。根据此标准曲线可以测定出未知样品的细胞数量（使用此标准曲线的前提是实验的条件要一致，便于确定细胞的接种数量以及加?/span>CCK-8后的培养时间。）
方法事/span>.细胞活性检浊/span>
1、在96孔板中接种细胞悬液（100 μL/孔）。将培养板放在培养箱中预培养一段时间（37ℂ/span>,5% CO2）、/span>
2、向每孔加入10 μL CCK-8溶液、/span>
3、将培养板在培养箱内孵育1-4小时、/span>
4、用酶标仪测定在450 nm处的吸光度、/span>
方法丈/span>.细胞增殖-毒性检浊/span>
1、在96孔板中加?/span>90 μL的细胞悬液。将培养板放在培养箱预培兺/span>24小时＇/span>37ℂ/span>＋/span>5% CO2）、/span>
2、向培养板加?/span>10 μL不同浓度的待测物质、/span>
3、将培养板在培养箱中孵育适当的时间（例如９/span>6?/span>12?/span>24戕/span>48小时）、/span>
4、向每孔加入10 μL CCK-8溶液、/span>
5、将培养板在培养箱内孵育1-4小时、/span>
6、用酶标仪测定在450 nm处的吸光度、/span>
活力计算９/span>
细胞活力(%)=[A(加药)-A(空白)]/[A(不加?/span>)-A(空白)] ×100
A(加药)：具有细胞?/span>CCK溶液和药物溶液的孔的吸光?/span>
A(空白)：具有培养基咋/span>CCK溶液而没有细胞的孔的吸光?/span>
A(0加药)：具有细胞?/span>CCK溶液而没有药物溶液的孔的吸光?/span>
细胞活力：细胞增殖活力或细胞毒性活劚/span>
注意事项:
1，由于使?/span>96孔板进行检测，如果细胞培养时间较长，一定要注意蒸发问题。一方面，由亍/span>96孔板周围一圈最容易蒸发，可以采取弃用周围一圈的办法，改加相同量皃/span>PBS?/span>水或培养液；另一方面，可以把96孔板置于靠近培养箱内水源的地方，以缓解蒸发、/span>
2，本试剂盒的检测依赖于脱氢酶催化的反应＋/span>所以还原剂(例如一些抗氧化剁/span>)会干扰检测。如果待测物质有氧化性或还原性的话，可在功/span>CCK-8之前更换新鲜培养基（除去培养基，并用培养基洗涤细胞两次，然后加入新的培养基），去掉药物影响。当然药物影响比较小的情况下，可以不更换培养基，直接扣除培养基中加入药物后的空白吸收即可。培养基中酚红和血清的吸光度，在计算时通过扣除空白孔中本底的吸光度而消去，因此不会对检测造成影响、/span>
3，有条件的情况下建议采用多通道移液器，可以减少平行孔间的差异。加?/span>CCK-8试剂时，建议斜贴着培养板壁加，不要插到培养基页面下加，容易产生气泡，会干扰OD值读数。加完之后最好能够离心，以免CCK-8液滴悬挂在壁上。用酶标仪检测前需确保每个孔内没有气泡，否则会干扰测定、/span>
4，若暂时不测宙/span>OD值，可以向每孔中加入10 μL 0.1M皃/span>HCL溶液或耄/span>1% w/v SDS溶液，并遮盖培养板避光保存在室温条件下、/span>24小时内测定，吸光度不会发生变化、/span>
5，建议先做几个孔摸索接种细胞的数量和加入CCK-8试剂后的培养时间。白细胞可能需要培养较长时间。若使用24孔板戕/span>6孔板实验，请先计算每孔相应的接种量，并按照每孔培养基总体积的10%加入CCK-8溶液、/span>
6，若没有450nm的滤光片，可使用吸光度在430-490 nm之间的滤光片，但?/span>450nm滤光片的检测灵敏度最高、/span>
7，金属对CCK-8显色有影响。终浓度丹/span>1 mM的氯化亚铅、氯化铁?/span>CuSO4会抑刵/span>5%?/span>15%?/span>90%的显色反应，使灵敏度降级。如果终浓度?/span>10 mM的话，将伙/span>100%抑制、/span>
8，本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品。为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作、/span>
