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间充质干细胞微载?片状载体培养细胞计数解决方案
作者：
艾贝?/font> 2024.10.10 点击132欠/div>
间充质干细胞(Mesenchymal Stem Cells，MSC)是一类多能干细胞，能够分化为多种细胞类型，有很强的自我更新能力，具有免疫调节功能，且能分泌多种生物活性因子促进组织修复和再生。因此，MSC在再生医学、组织工程、免疫调节、药物筛选等方面有着广泛的应用潜力、br style="box-sizing: border-box; margin: 0px; padding: 0px; font-family: " pingfang="" microsoft="" font-size:="" line-height:="" font-weight:="" font-style:="" vertical-align:="" background:="" -webkit-tap-highlight-color:="" appearance:=""/>
MSC属于贴壁依赖的细胞，通常需要附着在培养表面才能保持干性以及有效增殖和生长。为了进一步发挥MSC的功能，通常会利用微载体或者片状载体进行大规模培养。在MSC的微载体/片状载体培养过程中，常规使用的是胰酶消化后的细胞悬液进行细胞计数，观察MSC细胞浓度变化和活率变化，但也面临一些问题：
胰酶消化微载体上的细胞，往往不能完全消化：/strong>
胰酶过度消化也容易造成细胞损伤，活性下降、/strong>
艾贝?span style="box-sizing: border-box; margin: 0px; padding: 0px; font-family: " pingfang="" microsoft="" font-size:="" line-height:="" font-weight:="" font-style:="" vertical-align:="" background:="" -webkit-tap-highlight-color:="" appearance:="" color:="">Countleader?双荧光细胞计数仪，搭配艾贝泰自产细胞裂解涱/strong>A+B涱/strong>，可很好的解决胰酶消化操作复杂、结果准确性低的问题、br style="box-sizing: border-box; margin: 0px; padding: 0px; font-family: " pingfang="" microsoft="" font-size:="" line-height:="" font-weight:="" font-style:="" vertical-align:="" background:="" -webkit-tap-highlight-color:="" appearance:=""/>
MSC微载体培养计数方?nbsp;
首先将培养的MSC样本分为两份９br style="box-sizing: border-box; margin: 0px; padding: 0px; font-family: " pingfang="" microsoft="" font-size:="" line-height:="" font-weight:="" font-style:="" vertical-align:="" background:="" -webkit-tap-highlight-color:="" appearance:=""/>
一份样本中按等体积加入Reagent A100 裂解缓冲液处理微载体悬浮培养物，裂解缓冲液使细胞质膜通透并从微载体上释放细胞核。然后用等体积的Reagent B稳定细胞核，形成稳定的细胞核悬液(样品1)，取样品1与AOPI染料1:1 混合，吸?5μL 染色后的细胞样品加入到FL8-slides耗材的待测通道?通道1)、br style="box-sizing: border-box; margin: 0px; padding: 0px; font-family: " pingfang="" microsoft="" font-size:="" line-height:="" font-weight:="" font-style:="" vertical-align:="" background:="" -webkit-tap-highlight-color:="" appearance:=""/>
另外一份样?样品2)同时与AOPI染料1:1 混合 吸取15μL染色后的细胞样品加入到FL8-slides耗材的待测通道?通道2)、br style="box-sizing: border-box; margin: 0px; padding: 0px; font-family: " pingfang="" microsoft="" font-size:="" line-height:="" font-weight:="" font-style:="" vertical-align:="" background:="" -webkit-tap-highlight-color:="" appearance:=""/>
Countleader? FL 1000细胞计数仪内置“Viability and Cell Count Assay A100 And B”分析方法。通道1获得总细胞浓度，通道2获得死细胞浓度?nbsp;
PI能够与死细胞、细胞裂解后的细胞核染色，呈现红色荧光。无需手动计算，设备软件自行运算，直接快速、准确的获得微载体培养MSC的活细胞浓度以及活率、br style="box-sizing: border-box; margin: 0px; padding: 0px; font-family: " pingfang="" microsoft="" font-size:="" line-height:="" font-weight:="" font-style:="" vertical-align:="" background:="" -webkit-tap-highlight-color:="" appearance:=""/>
MSC片状载体培养计数方法
收集2-3个片状载体至50 mL离心管中，加入适量体积(淹没整个片状载体为准)的Reagent A100 裂解缓冲液，裂解10 min(按照不同载体材质，裂解时间可分别设置5 min?0 min?5 min?0 min等，如果延长时间后，细胞数量没有显著增加，可以确定最佳孵育时?，加入等体积的Reagent B 稳定细胞核，混合均匀、br style="box-sizing: border-box; margin: 0px; padding: 0px; font-family: " pingfang="" microsoft="" font-size:="" line-height:="" font-weight:="" font-style:="" vertical-align:="" background:="" -webkit-tap-highlight-color:="" appearance:=""/>
取裂解完毕后的混合液与AOPI染料1:1 混合,吸取15μL 染色后的细胞样品加入到FL8-slides耗材的待测通道中。Countleader? FL 1000细胞计数仪内置“Viability and Cell Count Assay (AOPI)”分析方法，设置样本名称、视野面积以及稀释倍数。PI能够与细胞裂解后的细胞核染色，呈现红色荧光、br style="box-sizing: border-box; margin: 0px; padding: 0px; font-family: " pingfang="" microsoft="" font-size:="" line-height:="" font-weight:="" font-style:="" vertical-align:="" background:="" -webkit-tap-highlight-color:="" appearance:=""/>
·裂解后细胞核图片·
细胞计数结果９span style="box-sizing: border-box; margin: 0px; padding: 0px; font-family: " pingfang="" microsoft="" font-size:="" line-height:="" font-weight:="" font-style:="" vertical-align:="" background:="" -webkit-tap-highlight-color:="" appearance:="" color:="">片载体细胞浓度（cells/cm2（/strong>=
注：艾贝泰提供的Reagent A100和Reagent B也可用于结团细胞的裂解计数，精确获得结团细胞的计数结果、br style="box-sizing: border-box; margin: 0px; padding: 0px; font-family: " pingfang="" microsoft="" font-size:="" line-height:="" font-weight:="" font-style:="" vertical-align:="" background:="" -webkit-tap-highlight-color:="" appearance:=""/>
Countleader? FL 1000细胞计数仪，具备台盼蓝、AOPI双荧光双分析模式?通道耗材，操作简单，重复性好，符合FDA?1 CFR Part11的要求！
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