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禽传染性支气管炎病毒通用RT-PCR试剂盒
禽传染性支气管炎病毒通用RT-PCR试剂盒图片
包装: 50次
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半岛bd体育手机客户端 别名: Avian Infectious Bronchitis Virus(AIBV) RT-PCR Kit
半岛bd体育手机客户端 介绍

半岛bd体育手机客户端 及特点

禽传染性支气管炎病毒(Avian Infectious Bronchitis Virus,AIBV)会引起鸡传染性支气管炎,主要传播方式是病鸟从呼吸道排出病毒,经空气飞沫传染给易感鸟,此外可通过被污染的饲料、饮水、笼具等经消化道传染。过热、严寒、拥挤、通风不好及维生素、矿物质供应不足均可促使本病发生,该病的发生会给养殖业造成较大的经济损失,因此灵敏快捷的诊断半岛bd体育手机客户端 具有重要的意义。本半岛bd体育手机客户端 基于 PCR原理开发,它具有下列特点:

1、一站式,用于不需要单独准备每种成分,包括引物和对照。

2、根据禽传染支气管炎病毒的保守基因序列设计的引物,具有良好的特异性。

3、灵敏度可以达到 1000拷贝/反应。

4、使用一管式 RT-PCR技术,RT和 PCR两步在一个试管内完成,不需要中间转移样品,降低了操作误差和可能的污染。

5、本半岛bd体育手机客户端 足够 50次 20μL体系的 RT-PCR。

6、本半岛bd体育手机客户端 只能用于科研,不能用于临床。

规格及成分

成份 编号 十孔盒包装
5×双酶一管式 RT-PCR Buffer 91202a 200 μL(橘黄盖)
MMLV-Taq Mix 91202b 75 μL(红盖)
超纯水 100935 1 mL(亮黄盖)
禽传染支气管炎病毒通用 RT-PCR引物混合液 13-86600yw 100 μL(白盖)
禽传染支气管炎病毒通用 RT-PCR阳性对照(1×108拷贝/μL) 60908-86600pc 50 μL(黄盖)
使用手册 13-86600sc 1份

注:为避免扩散传染性病原,本半岛bd体育手机客户端 不提供活体样品做阳性对照,只提供专一的DNA片段作为阳性对照。

运输及保存

低温运输,-20℃保存,保存期限为 12个月。收到货后阳性对照需要跟其他成分分开放置,因为其容易污染其他成分,造成假阳性。

自备试剂

样品 RNA

使用方法

一、样品 RNA的制备1、如果有 N个样品,必须设置 N+2个提取,多出的一个是 PC(样品制备阳性对照),一个是 NC(样品制备阴性对照)。可以用 10μL禽传染支气管炎病毒通用 RT-PCR阳性对照的 100倍稀释的(稀释后浓度为 1×106拷贝/μL,10μL相当于 1万拷贝,可以将 10μL原液加入到 990μL自备 TE溶液中,充分混匀,此为 100倍稀释液。)再加上一定量的水作为制备的阳性对照(加水后其总体积跟样品一样,样品体积多少取决于所用试剂盒的要求)。可以用水作为制备的阴性对照。制备所得成为样品 RNA。

2、用自选方法纯化 N+2个样品的 RNA,本试剂盒跟市场上大多数病毒 RNA提取试剂盒兼容。

二、设置 RT-PCR反应(20μL体系)

3、如果有 N+2个样品,则标记 N+4个 PCR管(额外增加的两个管一个是 RT-PCR阳性对照,另一个是 RT-PCR阴性对照)并按照下表在 PCR管中加入下列成分:

成份

N+2个样品管 RT-PCR阴性对照管 RT-PCR阳性对照管
5×双酶一管式 RT-PCR Buffer 各 4 μL 4 μL 4 μL
禽传染支气管炎病毒通用 RT-PCR引物混合液 各 2 μL 2 μL 2 μL
N+2个制备的 RNA样品 各 12.5 μL - -
超纯水 - 12.5 μL -
禽传染支气管炎病毒通用 RT-PCR阳性对照的 100倍稀释液 - - 12.5 μL
MMLV-Taq Mix 1.5 μL 1.5 μL 1.5 μL

4、上机进行 RT-PCR,RT-PCR反应参数为:

过程 温度 时间
逆转录 42℃ 30 min
预变性 94℃ 5 min
PCR反应(35个循环) 94℃ 30 sec
PCR反应(35个循环) 55℃ 30 sec
PCR反应(35个循环) 72℃ 20 sec
延伸 72℃ 10 min

5、琼脂糖电泳检测扩增效果,阳性样品预期得到的扩增产物长度为 137bp。如果阴性对照有此扩增产物或阳性对照无此扩增产物,则说明实验失败,需要分析实验失败的原因。只有在阴性对照没有此扩增产物、阳性对照有此扩增产物的情况下,才有必要分析样品的实验结果,如果有此扩增产物则为阳性,如果无则为阴性。

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