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PCR/RT-PCR >> PCR试剂盒
小麦叶疫病菌PCR试剂盒
小麦叶疫病菌PCR试剂盒图片
包装: 50次
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半岛bd体育手机客户端 别名: Alternaria triticin PCR Kit
半岛bd体育手机客户端 介绍

半岛bd体育手机客户端 及特点

小麦叶疫病菌学名为Alternaria triticina Prasada&Prabhu,英文名为leaf blight of wheat,它可以导致叶片病变坏死。小麦叶疫病在许多国家都是重要的检疫性病害,因此灵敏快捷地检测小麦叶疫病菌具有重要的意义。本半岛bd体育手机客户端 就是为满足此需求而开发的、专门检测小麦叶疫病菌的PCR试剂盒,它具有下列特点:

1、即开即用,用户只需要提供样品DNA模板。

2、半岛bd体育手机客户端 经过精心优化,分析灵敏性能到达 100拷贝/反应。

3、提供阳性对照,便于区分假阴性样品。

4、特异性高,引物是根据小麦叶疫病菌DNA高度保守区设计,只能检测小麦叶疫病菌,不会跟除此之外的其他病菌的DNA发生交叉反应。

5、本半岛bd体育手机客户端 足够50次20μL体系的PCR反应。

6、本半岛bd体育手机客户端 只能用于定性实验,不能用于定量。

7、本半岛bd体育手机客户端 只能用于科研。

规格及成分

成份

编号

五孔盒包装

PCR MagicMix 3.0

90805

1mL(红盖)

超纯水

100935

1mL(紫盖)

小麦叶疫病菌PCR引物混合液

yw13-1100

100μL(白盖)

小麦叶疫病菌PCR阳性对照(1×107拷贝/μL)

pc1100-AY154695

50μL(黄盖)

使用手册

13-1100sc

1份

注:为避免扩散传染性病原,本半岛bd体育手机客户端 不提供活体样品做阳性对照,只提供专一的DNA片段作为阳性对照。

运输及保存

低温运输,-20℃保存,保存期限为12个月。

自备试剂

样品DNA

使用方法

一、样品DNA的制备

1、如果有N个病菌样品,必须设置N+2个提取反应,多出的两个中一个是PC(样品制备阳性对照),一个是NC(样品制备阴性对照)。可以用10μL小麦叶疫病菌PCR阳性对照(1×107拷贝/μL,本试剂盒提供)再加上一定量的水作为制备的阳性对照(加水后其总体积跟样品一样,样品体积多少取决于所用试剂盒的要求)。可以用水作为制备的阴性对照。

2、用自选方法纯化上述N+2个样品的DNA。本试剂盒跟市场上大多数病菌DNA提取试剂盒兼容。也可以选用本公司的相关的核酸提取试剂盒。

二、设置PCR反应(20μL体系)

3、标记N+4个PCR管,其中N+2个用于上步得到的DNA样品,额外增加的两个管一个用于PCR阳性对照,另一个用于PCR阴性对照。按照下表在各PCR管中加入下列成分:

成份

N+2个

样品管

PCR阴性对照

PCR阳性对照

PCR MagicMix 3.0

各10μL

10μL

10μL

小麦叶疫病菌PCR引物混合液

各2μL

2μL

2μL

制备的N+2个DNA样品

各8μL

不加

不加

超纯水

不加

8μL

不加

小麦叶疫病菌PCR阳性对照

的10倍稀释液

不加

不加

8μL

4、上机进行PCR,PCR反应参数为:

过程

温度

时间

预变性

95℃

5分钟

PCR反应(35个循环)

95℃

20秒

55℃

20秒

72℃

40秒

延伸

72℃

10分钟

三、电泳分析

5、取10-20uL扩增产物进行常规琼脂糖电泳,检测扩增效果,由于扩增产物较短,建议用1.5%-2.0%的琼脂糖凝胶。

6、阳性样品预期得到的扩增产物长度为520bp。如果两个阴性对照(样品制备阴性对照或PCR阴性对照)有此扩增产物,说明环境污染,则整个实验无效,不需要分析实验结果。

7、如果所有样品和PCR阳性对照均无此扩增产物,则说明有系统性的问题(试剂,设备,程序,操作等),需要重复并排查原因。

8、如果没有上述两种情况,则实验有效,可以分析样品的扩增结果。N+2个样品中扩增产物的判断为阳性,无则判定为阴性。

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