半岛bd体育手机客户端 及特点

非洲猪瘟病毒(African swine fever, ASF)是由非洲猪瘟病毒病毒(Africanswine fever virus, ASFV)引起猪的一种急性、热性、高度接触传染性疾病，病死率高达 100%，是我国一类动物疫病和世界动物卫生组织规定的必须报告的动物疫病，受到世界各国的高度重视。因此 ASFV的快速准确鉴定，对该病的预防和检疫有着重要作用。本半岛bd体育手机客户端 就是根据 PCR原理开发的专门检测非洲猪瘟病毒的试剂盒，它具有下列特点：

1、即开即用，用户只需要提供样品 DNA模板。

2、提供阳性对照，便于区分假阴性样品。

3、半岛bd体育手机客户端 精心优化且特异性高，引物是根据非洲猪瘟病毒 DNA高度保守区设计，不会跟除此之外的其它微生物 DNA发生交叉反应。

4、PCR mix中含上样染料，PCR后可以直接上样电泳。

5、本半岛bd体育手机客户端 足够 50次 20μL体系的 PCR反应。

6、本半岛bd体育手机客户端 只能用于定性实验，不能用于定量。

7、本半岛bd体育手机客户端 只能用于科研。

规格及成分

成份	编号	五孔盒包装
2×PCR MagicMix 3.0	90805	500μL(绿盖)
超纯水	100935	1 mL(白盖)
非洲猪瘟病毒 PCR引物混合液	13-23000yw	100 μL(红盖)
非洲猪瘟病毒 PCR阳性对照(1×106拷贝/μL)	23000pc	50 μL(黄盖)
使用手册	13-23000sc	1份

注：为避免扩散传染性病原，本半岛bd体育手机客户端 不提供活体样品做阳性对照，只提供专一的核酸片段作为阳性对照。

运输及保存

低温运输，-20℃保存，保存期限为 12个月。

自备试剂

样品 DNA

使用方法

一、样品 DNA的制备

1、如果有 N个样品，必须设置 N+2个提取反应，多出的两个中一个是 PC(样品制备阳性对照)，一个是 NC(样品制备阴性对照)。可以用 10μL非洲猪瘟病毒 PCR阳性对照(1×10⁶拷贝/μL，本试剂盒提供)再加上一定量的水作为制备的阳性对照(加水后其总体积跟样品一样，样品体积多少取决于所用试剂盒的要求)。可以用水作为制备的阴性对照。

2、用自选方法纯化上述 N+2个样品的 DNA。本试剂盒跟市场上大多数细菌DNA提取试剂盒兼容。

二、设置 PCR反应(20μL体系)

3、标记 N+4个 PCR管，其中 N+2个用于上步得到的 DNA样品，额外增加的两个管一个用于 PCR阳性对照，另一个用于 PCR阴性对照。按照下表在各 PCR管中加入下列成分：

成分/每管	样品管N+2个	PCR阴性对照	PCR阳性对照
2×PCR MagicMix 3.0	10 μL	10 μL	10 μL
非洲猪瘟病毒 PCR引物混合液	2 μL	2 μL	2 μL
制备的 N+2个 DNA样品	8 μL	-	-
超纯水	-	8 μL	-
非洲猪瘟病毒 PCR阳性对照的 10倍稀释液	-	-	8 μL

4、上机进行 PCR，PCR反应参数为:

过程	温度	时间
预变性	95℃	10 min
PCR反应(40个循环)	95℃	15 sec
PCR反应(40个循环)	60℃	60 sec
延伸	72℃	10 min

三、电泳分析

5、取 5-10uL扩增产物进行常规琼脂糖电泳，检测扩增效果，由于扩增产物较短，建议用 1.5%-2.0%的琼脂糖凝胶。

6、阳性样品预期得到的扩增产物长度为 200bp左右。如果两个阴性对照(样品制备阴性对照或 PCR阴性对照)有此扩增产物，说明环境污染，则整个实验无效，不需要分析实验结果。

7、如果所有样品和 PCR阳性对照均无此扩增产物，则说明有系统性的问题(试剂、设备、程序、操作等)，需要重复并排查原因。

8、如果没有上述两种情况，则实验有效，可以分析样品的扩增结果。N+2个样品中有扩增产物的判定为阳性，无则判定为阴性。