RT-基础型核酸扩增试剂(ERA法)
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半岛bd体育手机客户端 简介 半岛bd体育手机客户端 可应用于核酸RNA的快速扩增。 半岛bd体育手机客户端 特点 扩增快速:在大多数情况下,在20分钟内可将痕量级核酸样本扩增到达到可检出水平。 操作简便:半岛bd体育手机客户端 主要成分采用先进的冻干工艺预制成微球,无需专业设备,操作方便,步骤简单,无需专业技能培训。 灵敏度高:检测限可达到10-100拷贝/反应。 稳定性高:半岛bd体育手机客户端 为冻干形态,可常温运输,-20℃保存有效性超过一年。 操作注意要点: [1] 溶解剂需完全融化混匀,否则会对实验产生影响。 [2] RT-基础扩增试剂在使用前放置室温平衡10min,剩余未用尽的试剂应注意防潮密封保存。 [3] 此处振荡混匀旨在将扩增试剂重悬,使体系分散均匀,混匀时间应在3-5s,3000rpm。 [4] ERA反应是靠激活剂来启动,一旦加入激活剂,务必立即上机孵育。 [5] 此处振荡混匀时间应在3s左右,时间过长会导致检出时间延后。 [6] ERA是一类多酶反应体系(即酶促重组等温扩增技术),若不做纯化,也可用蛋白酶K(5μg/100μl)56℃ 消化5分钟,若直接跑核酸电泳胶,会堵塞胶孔,核酸无法跑出。 注意事项 1. 本试剂盒仅用于非医用检测;应存储于-20℃、干燥、避光的环境。 2. ERA扩增产物的气溶胶易造成假阳性,为避免交叉污染,试剂配制区与扩增分析区应分隔开。 3. 实验时应设置不加模板的空白对照,以确认是否有待扩增核酸的污染。 4. 在不同的核酸提取方法下,所提取的样本RNA含量和纯度会有差异,可能会导致出现扩增效率不一的现象(详情请查阅PCR抑制剂:乙醇、苯酚、血红素等等)。 5. 阳性标准品建议添加2μl~5μl,待检样本添加量范围为2μl~10μl。如果待检样本浓度较高,则仅需添加2μl,反之,则加大样本添加量,最大体积不超过10μl。 6. 单独添加模板RNA至反应管盖时,应与激活剂分开,防止与激活剂混合后稳固RNA的三级结构,从而导致逆转录酶受到抑制。 7. 如果模板RNA拷贝数低,请在反应5分钟后取出反应管,振荡混匀并短暂离心,再放回恒温仪中。 8. 扫码关注先达基因公众号,输入“问题解答”获取操作视频及常见问题解决方案。
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