琥珀酸脱氢酶,是线粒体内膜的结合酶,属膜结合酶,是连接氧化磷酸化与电子传递的枢纽之一,可为真核细胞线粒体和多种原核细胞需氧和产能的呼吸链提供电子,为线粒体的一种标志酶。作为参与三羧酸循环的关键酶,琥珀酸脱氢酶是反映线粒体功能的标志酶之一,其活性一般可作为评价三羧酸循环运行程度的指标,对于评价精子线粒体功能、研究致奶牛酮缺乏症病理过程等到具有重要意义。
琥珀酸脱氢酶(SDH)催化底物反应,FAD是该反应的辅基,FAD被还原成FADH,该反应与2,6- DPIP的还原相偶联,测定2,6-DPIP的还原速度可以推算出SDH的活力。
测定原理:
琥珀酸脱氢酶(SDH)催化底物反应,FAD 是该反应的辅基,FAD 被还原成 FADH,该反应与 2,6- DPIP 的还原相偶联,测定 2,6-DPIP 的还原速度可以推算出 SDH 的活力。
半岛bd体育手机客户端 优点如下:
1、快速简便:速率法操作全程约5分钟,可做5-10个样本
2、取样量微:取样50ul~100ul即可测血清(浆)中的SDH活力,只需5mg左右组织就可测组织匀浆、胞浆中的SDH、0.2g组织可测线粒体及微粒体中的SDH。
3、稳定性好:试剂盒2~8℃存放3个月有效。
4、再现性好:变异系数CV=1.4%。
5、回收试验: X =103%。
6、受外界影响因素小:干扰因素少,重复性强。
7、测试面广:可测动物血清(浆)、组织等、多种培养细胞、植物组织等
试剂组成与配制:(50 管/48 样)
试剂一:液体 60ml×2 瓶,4°C冷藏 3 个月;
试剂二:液体 6ml×1 瓶,避光 4°C冷藏 3 个月;
试剂三:液体 6ml×1 瓶,避光 4°C冷藏 3 个月;
试剂四:液体 6ml×2 瓶,避光 4°C冷藏 3 个月;
试剂五:液体 6ml×1 瓶,避光-20°C冷藏 3 个月,如需分多次使用,建议老师将试剂五分装后冷冻保存,避免多次的反复冻融;
试剂六:液体 6ml×1 瓶,4°C冷藏 3 个月。
工作液的配制:
按试剂一:试剂二:试剂三:试剂四:试剂五:试剂六=2 : 0.1 : 0.1 : 0.2 : 0.1 : 0.1的比例进行配制,用多少配多少,现用现配,配好后一定要避光保存。
所需半岛游戏平台官网入口网址 及自备试剂:
1、分光光度计(比色测定波长为600nm)
2、恒温水浴箱或气浴箱 (孵育温度为37℃)
3、漩涡混匀器
4、微量移液器
样本收集与前处理:
动物组织样本:可用生理盐水按重量体积比制备成组织匀浆液,离心取上清测定。
培养细胞、植物组织:常用PBS作为匀浆介质破碎后离心取上清测定。
具体的样本前处理:参考我们随货发送的《实验方法学》以及试剂盒中详细说明书。
操作流程:
1、按步骤加入2.6ml混合试剂,加入100l样本
2、20秒时600nm测出OD1
3、1分20秒时600nm测出OD2