东盛生物(Dongsheng Biotech)
Guangzhou Dongsheng Biotech Co., Ltd.
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DH5α感受态细胞
克隆与表达 >> 感受态细胞
DH5α感受态细胞图片

品牌: 东盛
产地: 广州
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包装与价格:
订货号 纯度规格 包装 价格(元)
C1041 100 μl×5 -
C1042 100 μl×10 -
品牌: 东盛
产地: 广州
半岛bd体育手机客户端 介绍

半岛bd体育手机客户端 组分:

半岛bd体育手机客户端 名称 C1041 C1042
感受态细胞 100 μl×5 100 μl×10
对照质粒pUC19 (1 ng/μl) 10 μl 10 μl
说明书 1 份 1 份

半岛bd体育手机客户端 简介:
本公司生产的DH5α感受态细胞是采用大肠杆菌DH5α菌株经特殊工艺处理得到的感受态细胞,可用于DNA 的化学转化。使用pUC19 质粒检测,转化效率可达108个转化子/μg质粒DNA,-70℃保存3个月转化效率可保持在90%以上。
每支感受态可以酌情分装使用,降低了实验的成本。质量稳定,使用方便,质优价廉。
基因型:F-,φ80lacZΔM15,Δ(lacZYA-argF)U169, recA1,endA1,hsdR17(rk-,mk+),phoA,supE44,λ-,thi-1,gyrA96,relA1

半岛bd体育手机客户端 特点:
DH5α菌株一种常用于质粒克隆的菌株。其φ80lacZΔM15基因的产物可与pUC载体编码的b-半乳糖苷酶氨基端实现a互补,可用于蓝白斑筛选。recA1和endA1 的突变有利于克隆DNA 的稳定和高纯度质粒DNA的提取。

储存条件:
-70℃冻存

操作方法(以下操作均按无菌条件的标准进行)
1 取感受态细胞置于冰浴中,如需分装可将刚融化细胞悬液分装到无菌预冷的离心管中,置于冰浴中。
● 一次转化感受态细胞的建议用量为50-100 μl,可以根据实际情况分装使用。应注意所用DNA 体积不要超过感受态细胞悬液体积的十分之一。
以下实验以100 μl感受态细胞为例。
2 向感受态细胞悬液中加入目的DNA(100 μl 的感受态细胞能够被1 ng 超螺旋质粒DNA 所饱和),轻轻旋转离心管以混匀内容物,在冰浴中静置30 分钟。
3 将离心管置于42℃水浴中放置60-90 秒,然后快速将管转移到冰浴中,使细胞冷却2-3 分钟,该过程不要摇动离心管。
4 向每个离心管中加入900 μl 无菌的SOC 或LB 培养基(不含抗生素), 混匀后置于37℃摇床振荡培养1 小时(160-220 转/分钟),目的是使质粒上相关的抗性标记基因表达,使菌体复苏。
5 将离心管内容物混匀,吸取100 μl 已转化的感受态细胞加到含相应抗生素的SOB 或LB 固体琼脂培养基上,用无菌的弯头玻棒轻轻的将细胞均匀涂开。将平板置于室温直至液体被吸收,倒置平板,37℃培养12-16 小时。
● 涂布用量可根据具体实验来调整。如转化的DNA 总量较多,可取更少量转化产物涂布平板;反之,如转化的DNA 总量较少,可取200-300 μl 转化产物涂布平板。如果预计的克隆较少,可通过离心(4,000 rpm, 2分钟)后吸除部分培养液,悬浮菌体后将其涂布于一个平板中。(涂布剩余的菌液可置于4℃保存,如果次日的转化菌落数过少可以将剩下的菌液再涂布新的培养板)

注意事项
1. 感受态细胞应保存在 -70℃,不可多次冻融和放置时间过长,以避免降低感受态细胞的转化效率。
2. 进行转化操作时,应根据相应温度及无菌条件的要求进行。
3 为防止转化实验不成功,可以保留部分连接反应液,以重新转化,将损失降到最低。


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